乙酰胆碱酯酶(AChE)检测试剂盒
产品概述
胆碱酯酶是胆碱能神经递质乙酰胆碱的水解酶,直接参与神经功能调节、肌肉运动、大脑思维、记忆等重要功能。胆碱酯酶活力有改变时,以上各组织器官功能也会有改变。另外,有机磷农药是胆碱酯酶的特异性抑制剂,它通过各种途径进入机体后可抑制胆碱酯酶的活性。 乙酰胆碱酯酶(AChE)检测试剂盒利用乙酰胆碱酯酶(Acetylcholinesterase)水解乙酰胆碱生成胆碱及乙酸,胆碱可以与巯基显色剂反应生成TNB(对称三硝基苯,Sym-Trinitrobenzene)黄色化合物,根据颜色深浅进行比色定量,水解产物胆碱的数量可反应胆碱酯酶的活力。 本试剂盒适用于测定各种动物组织、血清(浆)、全血等样本中乙酰胆碱酯酶的活力。 本试剂盒灵敏度高,微量样本即可测出乙酰胆碱酯酶的水平;方法简便快速,准确稳定;无需气相色谱等高级仪器,只要一般的分光光度计即可。 可以提供细胞凋亡、增殖、毒性、活性氧、细胞代谢、氧化应激、细胞膜流动性、膜通透性转换孔、细胞耗氧率、细胞内pH、细胞粘附、细胞自噬等数百种检测试剂盒产品。 可以为您提供各种颜色的M系列、N系列、L系列、E系列、G系列等细胞膜、细胞质、细胞核、溶酶体、线粒体、内质网、高尔基体、骨架、微管等细胞、细胞亚结构荧光染色试剂盒产品,以及钙离子、钠离子、氩离子等各种荧光染色试剂盒产品。
保存温度
2-8℃ 避光
注意事项
开盖后组份按要求条件保存。
有效期
6个月
检测方法
分光光度计
适用样本
血清血浆/尿液/组织/细胞
产品应用
分光光度计
仪器准备
1.可见分光光度计
2.恒温水浴锅
3.离心机
4.漩涡混匀器
5.移液器
试剂准备
1.纯水
耗材准备
1.离心管
2.吸头
使用注意事项
1.试剂D打开后装在空的小塑料瓶内(附空瓶一只);
2.试剂E 天冷时会有沉淀或混浊,需在37℃水浴加热至透明后即可使用。
使用方法
试剂配制
1. 试剂A标准品工作液的配制:
取试剂A标准品一支加试剂F:生理盐水10ml混匀,即得1umol/ml标准品工作液,现用现配;
2. 底物缓冲液的配制:
使用前每支试剂B粉剂加试剂F:生理盐水20ml,制备成底物缓冲液;2-8℃可保存2周。
3. 显色工作液的配制:
使用前将试剂C:试剂F生理盐水=1:9稀释,制备成显色工作液;现用现配,也可一次配制30ml,避光2-8℃可保存3个月。
操作步骤:
(一)、样本前处理
组织样本:
准确称取组织重量,按重量(g):体积(ml)=1:9的比例,加入9倍体积的生理盐水,冰水浴条件下机械匀浆,2500转/分,离心10min,取上清待测(同时取部分上清测定蛋白浓度);血清(浆):取不抗凝或抗凝全血1000~1500转/分,离心8min,取上层血清(浆)。一般测定时用生理盐水按1:9比例将血清(浆)稀释(具体稀释浓度以预实验结果为准);
全血样本:
取0.1ml抗凝全血加纯水至10ml,即按1:99稀释,充分混匀;
(三)、计算公式:
A、 组织匀浆中乙酰胆碱酯酶的计算:
1. 单位定义:
每毫克组织蛋白在37℃保温6min,水解反应体系中1umol 基质为1个活力单位;
2. 计算公式:
组织匀浆中酶活力 = 测定OD值 – 对照OD值 X 标准品浓度 ÷待测样本蛋白浓度
(U/mgprot) 标准OD值 - 空白OD值 (1umol/ml) (mgprot/ml)
B、血清(浆)中乙酰胆碱酯酶的计算:
1. 单位定义:
每毫升血清样本在37℃保温6min,水解反应体系中1umol 基质为1个活力单位;
2. 计算公式:
血清(浆)中酶活力 = 测定OD值 – 对照OD值 X 标准品浓度 X待测样本测试前(U/ml) 标准OD值 - 空白OD值 (1umol/ml) 稀释倍数
1. 计算举例:
取10倍稀释后的血清0.03ml测乙酰胆碱酯酶的活力,测得对照管OD值为0.086,测定管OD值为0.498,标准管OD值为0.190,空白管为0.032,标准管浓度为1umol/ml,则计算结果如下:
血清(浆)酶活力 = 0.498 – 0.086 X 标准品浓度 X 10 =26.08 U/ml(U/ml) 0.190 – 0.032 (1umol/ml)
C、全血中乙酰胆碱酯酶的计算:
1. 单位定义:
每毫升全血在37℃保温6min,水解反应体系中1umol 基质为1个活力单位;
2. 计算公式:
全血中酶活力 = 测定OD值 – 对照OD值 X 标准品浓度 X待测样本测试前(U/ml) 标准OD值 - 空白OD值 (1umol/ml) 稀释倍数
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
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