总超氧化物歧化酶(SOD)检测试剂盒
产品概述
总SOD检测试剂盒采用黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase)活力, 通过黄嘌呤及黄嘌呤氧化酶反应系统产生超氧阴离子自由基(O2-),后者氧化羟胺形成亚硝酸盐,在显色剂的作用下呈现紫红色,用可见分光光度计测其吸光度。当被测样品中含SOD时,则对超氧阴离子自由基有专一性的抑制作用,使形成的亚硝酸盐减少,比色时测定管的吸光度值低于对照管的吸光度值,通过公式计算可求出被测样品中的SOD活力。 高等动物细胞内只有二种SOD即铜锌-SOD(CuZn-SOD)与锰-SOD(Mn-SOD),低等动物、单细胞生物及植物中除了铜锌-SOD(CuZn-SOD)与锰-SOD(Mn-SOD),还有铁-SOD(Fe-SOD)。通过测定T-SOD、Mn-SOD、CuZn-SOD、Fe-SOD,可以计算出各分型SOD的活力。 本试剂盒可测血清、血浆、脑脊液、胸水、腹水、肾透析液、尿液、红细胞、白细胞、血小板、心肌培养细胞、肿瘤培养细胞、各种动植物组织细胞及亚细胞水平(线粒体、微粒体)中的总SOD活力,并可用于微生物、药物、食品、饮料、化妆品研发过程中的总SOD活力检测。 可以提供细胞凋亡、增殖、毒性、活性氧、细胞代谢、氧化应激、细胞膜流动性、膜通透性转换孔、细胞耗氧率、细胞内pH、细胞粘附、细胞自噬等数百种检测试剂盒产品。
保存温度
2-8℃ 避光
注意事项
开盖后组份按要求条件保存。
有效期
6个月
检测方法
分光光度计
适用样本
血清血浆/组织/细胞
产品特点
1.快速:整个操作过程约50分钟。
2.取样量极微:本法取手指或耳垂等末稍血20μl-50μl即可测红细胞中的SOD,只需2ml静脉血可测白细胞中的SOD及血小板中SOD,只需6mg组织就可测组织血浆、胞浆、0.2g组织可测线粒体及微粒中的SOD。
3.灵敏度高:ID50=0.05g/ml是邻苯三酚法灵敏度的18倍,因而可测定心肌灌流液、脑脊液、胸腹水、肾透析液、心肌培养细胞、肿瘤培养细胞中的SOD,此法最灵敏。
4.稳定性好:试剂放在0℃-4℃冰箱中可保存6个月。取混合血清放在4℃冰箱中,三天内SOD活力不变。
5.再现性好:变异系数CV=1.7%,同一份标本这次测得结果与几天后测得结果相差无几。
6.受外界影响因素小,优于其它各种化学检测法,优于放免法。
7.测试面广:即可测T-SOD又可测得Mn-SOD也可测得CuZn-SOD,本法测试各种动物红细胞、白细胞、血小板、血清(浆)、心肌组织、肺、肝、肾、脾、耳膜、肾上腺等几十种组织匀浆、线粒体、微粒体、离体心肌灌流液、肾透析液、腹水、胸水、脑脊液、心肌培养细胞、肿瘤培养细胞等,效果均很佳。
8.不需要昂贵或特殊的仪器,只需恒温水浴箱与721、722、751、752等可见分光光度计。用简单的仪器测出高水平的指标。
产品应用
分光光度计
仪器准备
1.分光光度计(酶标仪)
2.恒温水浴锅
3.离心机
4.移液器
5.冰盒
试剂准备
1.PBS
2.冰醋酸
3.纯水
耗材准备
1.试管
2.吸头
使用注意事项
1.试管要洗干净,在测微量样品时,例如心肌培养细胞、肿瘤培养细胞、白细胞、血小板、线粒体、微粒体或离体心肌灌流液等尤为重要。
2.所有试剂的配制均应在测试前一天进行,目的使其充分溶解。配好后的试剂,4℃可以保存3-6个月,测试前从冷藏箱中拿出的试剂及样品要在室温中放30分钟后再用。
3.为避免测试误差,第yi次吸的试剂要丢掉,用作冲洗管道,吸嘴外周若挂有液体要用滤纸轻轻擦干,样品和试剂要垂直加入试管,不要加在管壁上(因试剂及样品量小)。水浴前要用旋涡混匀器充分混匀。
4.每次水浴时间为40分钟,(当室温低于20℃时水浴时间适当延长至45分钟)水浴温度37℃要固定。
5.对照管要做2支,并且放在所有测试管的中间做,取其平均值。或每9支测定管做一支对照管。
6.同一份标本测总SOD与Mn-SOD或者是测总SOD与CuZn-SOD时,只需测其中一对即可以。因为总SOD减去Mn-SOD等于CuZn-SOD;总SOD减去CuZn-SOD等于Mn-SOD。
7.测试前先预试以确定最jia取样量:当您第yi次使用本试剂盒测试某一种新的组织样品时最hao先做三只不同取样量的测试管。例如想测1%脑组织匀浆,取样量分别为10μl、30μl、50μl,然后计算结果应在0.15-0.55之间,即百分抑制率在15-55%之间,然后取百分抑制率在45%或48%左右的一管作为最jia取样量,因为酶的百分抑制率与酶的活力呈抛物线关系,若百分抑制率大于60%时,则需将样本浓度稀释或减少上样量再测试。若百分抑制率小于20%时,则需将样品量加大后再测试。
8.本试剂盒亦可用酶标仪读数(可在反应完后取200ul加进96孔板,于550nm处读数,计算时所有OD值减去空白板OD值代入公式计算即可)
使用方法
试剂配制
1. 试剂A:
试剂A工作液的配制:用时每瓶5ml储备液加蒸馏水稀释至50ml,4℃保存一年。
2. 试剂D:贮备液 -20℃保存。
用时和试剂D稀释液按1:14稀释,即为试剂D工作液,最hao现配现用。
配好的试剂D工作液2-8℃保存,不可冷冻。
3. 试剂E:
用时加70℃-80℃双蒸水37.5ml溶解后备用,若加热过程中水分蒸发减少,此时必须用蒸馏水补水至37.5ml,配好后的试剂避光4℃冷藏6个月。
4. 试剂F:
用时加蒸馏水37.5ml溶解后备用,配好后试剂避光4℃冷藏6个月。
5. 显色剂的配制:按照试剂E:试剂F:冰乙酸=3:3:2的体积比配成显色剂,最hao现配现用。配好后显色剂4℃避光冷藏3个月。
样本处理:
1. 组织匀浆的制备:
准确称取组织重量,按重量(g):体积(ml)=1:9的比例,加入9倍体积的匀浆介质(推荐0.86%或0.9%的生理盐水),冰浴,机械匀浆,制备成10%的匀浆液,2500-3000转/分,离心10min,取上清待测。
取得的上清液根据不同组织,再用匀浆介质稀释成不同浓度,进行最jia取样量的摸索,确定好最jia取样量后按下表进行正式实验。
2. 植物组织的前处理:
准确称取植物组织重量,按重量(g):体积(ml)=1:4的比例,加入4倍体积的匀浆介质(推荐0.1mol/L pH7.0-7.4磷酸盐缓冲液),冰浴,机械匀浆制备成20%的匀浆液,3500-4000转/分,离心10min,取上清待测。
取得的上清液根据不同组织,再用匀浆介质稀释成不同浓度,进行最jia取样量的摸索,确定好最jia取样量后按下表进行正式实验.
3. 高脂血症血清(浆)样本的前处理:
轻度高脂血症:外观略有混浊,血清测试前只需加等量的生理盐水稀释即可;
中度高脂血症:外观混浊较明显,血清测试前需加等量的生理盐水稀释,再加血清1/2量的无水乙醇混匀即可;
重度高脂血症:取50ul高脂血清(浆)加生理盐水200ul混匀后,加无水乙醇150ul充分混匀1min,再加入三氯甲烷150ul,充分混匀1min,3500转/分,离心10min,取上清待测
4. 红细胞抽提液的制作:
① 采集新鲜血或肝素抗凝的静脉血或动脉血50ul,加入盛有1-2ml生理盐水的带刻度的离心管中,500-1000转/分,离心10min;
② 用移液器也可用针筒接上麻醉针头吸去上清液(吸净),留沉淀的红细胞;
③ 在红细胞中加入冷双蒸水0.2ml,混匀(使红细胞充分溶解,将溶血液对光观察看是否呈现透明状,则表示充分溶解);
④ 加入95%乙醇0.1ml,振荡30秒;
⑤ 加入三氯甲烷0.1ml置漩涡混匀器充分抽提混匀1min;
⑥ 3500转/分离心8min。此时液体分三层:上层为SOD抽提液,中层为血红蛋白沉淀物,下层为三氯甲烷。若上清有混浊可加入少量固体NaCl后再离心5min,即可澄清。记录上清液体积,取5-20ul进行最jia取样量的摸索。(剩余的红细胞抽提液可放冰箱冷冻备用)
结果计算:
(一)血清(浆)、心肌灌流液、肾透析液、细胞培养液等总SOD活力计算:
1. SOD活性单位定义:
每毫升反应液中SOD抑制率达50%时所对应的SOD量为一个SOD活力单位(U)。
2. 总SOD活力计算公式:
(1)血清(浆)、心肌灌流液、肾透析液、细胞培养液等总SOD活力计算公式:
SOD活力(U/ml)=(对照吸光度-测定吸光度)÷对照管吸光度÷50%×反应体系稀释倍数×样品测试前稀释倍数
(2)高脂血症血清(浆)中总SOD活力计算公式:
SOD活力(U/ml)=(对照吸光度-测定吸光度)÷对照管吸光度÷50%×反应体系稀释倍数×样品测试前稀释倍数
反应体系稀释倍数= 反应液总量 = 试剂量 3.3ml + 反应体系中的取样量
取样量 反应体系中的取样量
重度高脂血症血清(浆)= 取样量50ul+生理盐水200ul+无水乙醇150ul=400ul
测试前的稀释倍数 取样量50ul 50ul
(二)组织匀浆中SOD活力计算:
1. SOD活性单位定义:
每毫克组织蛋白在1ml反应液中SOD抑制率达50%时所对应的SOD量为一个SOD活力单位(U)。
2. 计算公式:
SOD活力(U/mgprot)=(对照管吸光度-测定管吸光度)÷对照管吸光度÷50%×(反应液总体积÷取样量ml)÷样品中蛋白浓度(mgprot/ml)
(三)红细胞中总SOD活力计算:
1. SOD活性单位定义:
每克血红蛋白在1ml反应液中SOD抑制率达50%时所对应的SOD量为一个SOD活力单位(U)。
2. 红细胞中总SOD活力计算公式:
SOD活力(U/gHb)=(对照吸光度-测定吸光度)÷对照管吸光度÷50%×反应液体积×(抽提液总量÷测定抽提液量)x(1ml÷采血量)÷血红蛋白含量(gHb/ml)
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
总超氧化物歧化酶(SOD)检测试剂盒信息由上海博尔森生物科技有限公司为您提供,如您想了解更多关于总超氧化物歧化酶(SOD)检测试剂盒报价、型号、参数等信息,欢迎来电或留言咨询。除供应总超氧化物歧化酶(SOD)检测试剂盒外,上海博尔森生物科技有限公司还可为您提供CD106; INCAM-100; L1CAM;大鼠血管细胞粘附分子1(VCAM1)试剂盒、HMOX1; Hsp32; HMOX1D;大鼠血红素氧合酶1(HO1) ELISA试剂盒、ANG1; AGP1; AGPT; ANG-I大鼠血管生成素1(ANGPT1) ELISA Kit等产品,公司有专业的客户服务团队,是您值得信赖的合作伙伴。