超氧化物歧化酶（SOD）检测试剂盒（分型，测Cu-Zn、Mn、总）

产品概述

SOD分型检测试剂盒采用黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶（Superoxide Dismutase）活力， 通过黄嘌呤及黄嘌呤氧化酶反应系统产生超氧阴离子自由基（O2-），后者氧化羟胺形成亚硝酸盐，在显色剂的作用下呈现紫红色，用可见分光光度计测其吸光度。当被测样品中含SOD时，则对超氧阴离子自由基有专一性的抑制作用，使形成的亚硝酸盐减少，比色时测定管的吸光度值低于对照管的吸光度值，通过公式计算可求出被测样品中的SOD活力。 高等动物细胞内只有二种SOD即铜锌-SOD（CuZn-SOD）与锰-SOD（Mn-SOD），二者相加等于总SOD（T-SOD）。经样本前处理过的样本中Mn-SOD活力丧失，但CuZn-SOD活力不变。本试剂盒可以分别检测两种亚型SOD含量和总SOD含量。 本试剂盒可测血清（浆）、脑脊液、胸水、腹水、肾透析液、尿液、红细胞、白细胞、血小板、心肌培养细胞、肿瘤培养细胞、各种动植物组织细胞及亚细胞水平（线粒体、微粒体）中的SOD活力，并可检测微生物、生物、药物、食品、饮料、化妆品中的SOD活力。 可以提供细胞凋亡、增殖、毒性、活性氧、细胞代谢、氧化应激、细胞膜流动性、膜通透性转换孔、细胞耗氧率、细胞内pH、细胞粘附、细胞自噬等数百种检测试剂盒产品。 可以为您提供各种颜色的M系列、N系列、L系列、E系列、G系列等细胞膜、细胞质、细胞核、溶酶体、线粒体、内质网、高尔基体、骨架、微管等细胞、细胞亚结构荧光染色试剂盒产品，以及钙离子、钠离子、氩离子等各种荧光染色试剂盒产品。

保存温度

2-8℃ 避光

注意事项

开盖后组份按要求条件保存。

有效期

6个月

检测方法

分光光度计

适用样本

血清血浆/组织/细胞

产品特点

1.快速：整个操作过程约50分钟。

2.取样量极微：本法取手指或耳垂等末稍血20μl-50μl即可测红细胞中的SOD，只需2ml静脉血可测白细胞中的SOD及血小板中SOD，只需6mg组织就可测组织血浆、胞浆、0.2g组织可测线粒体及微粒中的SOD。

3.灵敏度高：ID50=0.05g/ml是邻苯三酚法灵敏度的18倍，因而可测定心肌灌流液、脑脊液、胸腹水、肾透析液、心肌培养细胞、肿瘤培养细胞中的SOD，此法最灵敏。

4.稳定性好：试剂放在0℃-4℃冰箱中可保存6个月。取混合血清放在4℃冰箱中，三天内SOD活力不变。

5.再现性好：变异系数CV=1.7%，同一份标本这次测得结果与几天后测得结果相差无几。

6.受外界影响因素小，优于其它各种化学检测法，优于放免法。

7.测试面广：即可测T-SOD又可测得Mn-SOD也可测得CuZn-SOD，本法测试各种动物红细胞、白细胞、血小板、血清（浆）、心肌组织、肺、肝、肾、脾、耳膜、肾上腺等几十种组织匀浆、线粒体、微粒体、离体心肌灌流液、肾透析液、腹水、胸水、脑脊液、心肌培养细胞、肿瘤培养细胞等，效果均很佳。

8.不需要昂贵或特殊的仪器，只需恒温水浴箱与721、722、751、752等可见分光光度计。用简单的仪器测出高水平的指标。

产品应用

分光光度计

仪器准备

1.550nm的分光光度计（对应波长的酶标记或半自动生化仪）

2.37℃恒温水浴锅

3.离心机

4.移液器

5.冰盒

试剂准备

1.生理盐水

2.蒸馏水

耗材准备

1.离心管

2.吸头

使用注意事项

1.试管要洗干净，在测微量样品时，例如心肌培养细胞、肿瘤培养细胞、白细胞、血小板、线粒体、微粒体或离体心肌灌流液等尤为重要。

2.所有试剂的配制均应在测试前一天进行，目的使其充分溶解。配好后的试剂，4℃可以保存3-6个月，测试前从冷藏箱中yi次吸的试剂要丢掉，用作冲洗管道，吸嘴外周若挂有液体要用滤纸轻轻擦干，样品和试剂要垂直加入试管，不要加在管壁上(因试剂及样品量小)。水浴前要用旋涡混匀器充分混匀。

4.每次水浴时间为40分钟，（当室温低于20℃时水浴时间适当延长至45分钟）水浴温度37℃要固定。

5.对照管要做2支，并且放在所有测试管的中间做，取其平均值。或每9支测定管做一支对照管。

6.同一份标本测总SOD与Mn-SOD或者是测总SOD与CuZn-SOD时，只需测其中一对即可以。因为总SOD减去Mn-SOD等于CuZn-SOD；总SOD减去CuZn-SOD等于Mn-SOD。

7.测试前先预试以确定最jia取样量：当您第yi次使用本试剂盒测试某一种新的组织样品时最hao先做三只不同取样量的测试管。例如想测1%脑组织匀浆，取样量分别为10μl、30μl、50μl，然后计算结果应在0.15-0.55之间，即百分抑制率在15-55%之间，然后取百分抑制率在45%或48%左右的一管作为最jia取样量，因为酶的百分抑制率与酶的活力呈抛物线关系，若百分抑制率大于60%时，则需将样本浓度稀释或减少上样量再测试。若百分抑制率小于20%时，则需将样品量加大后再测试。

8.本试剂盒亦可用酶标仪读数（可在反应完后取200ul加进96孔板，于550nm处读数，计算时所有OD值减去空白板OD值代入公式计算即可）

使用方法

试剂配制

1. 试剂A贮备液：（天冷时或放冰箱会有部分结晶析出，需热水浴溶解后再用）；

试剂A工作液的配制：用时每瓶加蒸馏水稀释至50ml，4℃保存一年。

2. 试剂D工作液的配制：

用时试剂D1贮备液和试剂D2稀释液按1：14稀释，即为试剂D工作液，现配现用。配好的试剂D工作液2-8℃保存，不可冷冻。

3. 试剂E配制：用时加70℃-80℃蒸馏水37.5ml溶解后备用，若加热过程中水分蒸发减少，此时必须用蒸馏水补水至37.5ml，配好后的试剂避光4℃冷藏6个月。

4. 试剂F配制：用时加蒸馏水37.5ml溶解后备用，配好后试剂避光4℃冷藏6个月。

5. 显色剂的配制：按照试剂E：试剂F：冰乙酸=3：3：2的体积比配成显色剂，最hao现配现用。配好后显色剂4℃避光冷藏3个月。

样本处理：

1. 取样本0.2ml加试剂G 0.2ml，漩涡混匀器充分混匀1分钟，3500-4000rpm离心15分钟，取上清进行CuZn-SOD测定。

（此上清液即经过处理后的样本，Mn-SOD活力丧失而CuZn-SOD活力不受影响）

2. 同时取生理盐水0.2ml加试剂G 0.2ml，漩涡混匀器充分混匀1分钟，3500-4000rpm离心15分钟，取上清作为CuZn-SOD对照。

操作：

1. 按下表加入试剂进行测定：

2. 充分混匀，室温放置10分钟。

3. 于波长550nm处，1cm光径比色杯，蒸馏水调零，比色。

结果计算：

血清（浆）、心肌灌流液、肾透析液、细胞培养液等总SOD与CuZn-SOD活力计算：

1. 定义：每毫升反应液中SOD抑制率达50%时所对应的SOD量为一个SOD活力单位（U）。

2. 血清（浆）、心肌灌流液、肾透析液、细胞培养液等总SOD活力计算公式：

SOD活力=（对照吸光度-测定吸光度）÷50%×反应体系 ×样品测试前

（U/ml） 对照管吸光度 稀释倍数 稀释倍数

3. 计算举例：

（1） 测人血清中SOD的活力，取未处理人血清30μl，测得总SOD对照管吸光度为0.526，总SOD测定管吸光度为0.255。

（2） 血清经试剂G处理后，取30μl，测得CuZn-SOD对照管吸光度为0.540，CuZn-SOD测定管吸光度为0.365。

（3） 将数据带入计算公式：

总SOD活力U/ml=（0.526-0.255）÷0.526÷50%×（3.33÷0.03）=114.38U/ml

CuZn-SOD活力U/ml=（0.540-0.365）÷0.540÷50%×（3.33÷0.03）=71.94U/ml

组织匀浆中SOD活力计算：

1. 定义：

每毫克组织蛋白在1ml反应液中SOD抑制率达50%时所对应的SOD量为一个SOD活力单位（U）。

2. 计算公式：

SOD活力= （对照吸光度-测定吸光度）÷50%×反应液总体积 ÷样品中蛋白浓度

（U/mgprot） 对照管吸光度 取样量（ml） （mgprot/ml）

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！