抑制与产生超氧阴离子自由基（O2-·）检测试剂盒

产品概述

抑制与产生超氧阴离子自由基检测试剂盒检测原理是利用模拟机体中黄嘌呤与黄嘌呤氧气化酶反应系统,产生超氧阴离子自由基,加入电子传递物质及显色剂,使反应体系呈现紫红色,可利用分光光度计测其吸光度。当抗超氧阴离子的物质,例如:白细胞,有些抗肿瘤的药物,可增加此反应,使超氧阴离子自由基增加,故比色时颜色变深.依据形成物的颜色深浅计算出抑制或产生超氧阴离子自由基的能力强弱。 试剂盒灵敏度高，稳定性好，使用方便，可用于测各种动物的血清/血浆、组织、白细胞、及某些中西药物等样本。 可以提供细胞凋亡、增殖、毒性、活性氧、细胞代谢、氧化应激、细胞膜流动性、膜通透性转换孔、细胞耗氧率、细胞内pH、细胞粘附、细胞自噬等数百种检测试剂盒产品。

保存温度

2-8℃ 避光

注意事项

开盖后组份按要求条件保存。

有效期

6个月

检测方法

分光光度计

适用样本

血清血浆/全血/组织/细胞

产品应用

分光光度计

仪器准备

1.分光光度计

2.恒温水浴锅

3.涡旋混匀器

4.离心机

5.移液器

6.冰箱

7.冰盒

试剂准备

1.纯水

耗材准备

1.试管

2.吸头

3.离心管

使用注意事项

1. 一般的含脂类的样本都可以按这个操作表操作，排除脂类对测定的干扰；

使用方法

试剂配制

1. 试剂A，天冷时或放冰箱会有部分结晶析出，需37℃水浴溶解后再用；

试剂A工作液的配制：用时每瓶5ml试剂A加纯水稀释至50ml，4℃保存，1年有效。

2. 试剂D工作液的配制：按试剂D1：D2=1:14比例配制，现配现用，4℃保存。

3. 试剂E，使用前加入70-80℃热纯水37.5ml溶解，配好后4℃避光保存。

4. 试剂F，使用前加入纯水37.5ml溶解，配好后4℃避光保存。

5. 显色剂配制：按试剂E溶液：试剂F溶液：冰乙酸=3:3:2的体积比配成显色剂，4℃避光保存，3个月有效。

6. Vc标准品储备液配制：一支Vc标准品中加纯水定容至5ml，配制后当天使用。

7. 0.15mg/ml Vc标准品工作液配制：1mlVc标准品储备液加4ml纯水5倍稀释，现配现用，30分钟有效。（Vc标准品配制后见光极易分解）

操作步骤：

按下表在试管中添加试剂：

混匀，静置10分钟，纯水调零，550nm，1cm光径，测各管OD值。

结果计算：

1. 血清（血浆）中抗超氧阴离子自由基活力单位的计算

定义：

在反应体系中，每升血清（血浆）在37℃反应40分钟所抑制的超氧阴离子自由基相当于1mg维生素C所抑制的超氧阴离子自由基的变化值为一个活力单位。

计算公式：

抗超氧阴离子 =（对照OD -测定OD）×标准品浓度 ×1000ml×样品测试前

活力单位（U/L） （对照OD -标准OD） （0.15mg/ml） 稀释倍数

2. 组织中抗超氧阴离子自由基活力单位的计算

定义：

在反应体系中，每克组织蛋白在37℃反应40分钟所抑制的超氧阴离子自由基相当于1mg维生素C所抑制的超氧阴离子自由基的变化值为一个活力单位。

计算公式：

抗超氧阴离子 = （对照OD -测定OD）×标准品浓度 ×1000ml÷待测样品蛋白

活力单位（U/gprot） （对照OD -标准OD） （0.15mg/ml） 浓度gprot/L

本试剂盒可检测白细胞，某些中西药物等样品产生超氧阴离子的改变。

计算公式如下：

1.定义：在反应体系中，每升（克）物质在37℃反应40分钟所抑制的超氧阴离子自由基相当于1mg维生素C所抑制的超氧阴离子自由基的变化值为一个活力单位。

2.计算公式：

公式一：

产生超氧阴离子=（测定OD –对照OD）×标准品浓度 ×1000ml×样品测试前

活力单位（U/L）（对照OD -标准OD） （0.15mg/ml） 稀释倍数

公式二：

产生超氧阴离子=（测定OD –对照OD）×标准品浓度 ×1000ml÷样品浓度

活力单位（U/g） （对照OD -标准OD） （0.15mg/ml） （g/L）

附录：脂类样本的测定

1. 操作表

2. 计算公式

定义：

在反应体系中，每升血清（血浆）在37℃反应40分钟所抑制的超氧阴离子自由基相当于1mg维生素C所抑制的超氧阴离子自由基的变化值为一个活力单位。

计算公式：

抗超氧阴离子= （测定空白OD -测定OD×标准品浓度×1000ml×样品测试前

活力单位（U/L） （对照OD -标准OD） （0.15mg/ml） 稀释倍数

3. 注意事项

① 一般的含脂类的样本都可以按这个操作表操作，排除脂类对测定的干扰；

② 三氯甲烷需要自备，并且对于一些重度高脂，有可能会出现加完与样本等量的三氯甲烷后上清还是浑浊，则需加大三氯甲烷的量，再次混匀离心至上清澄清。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！