丙二醛（MDA）检测试剂盒

产品概述

丙二醛(MDA)检测试剂盒(TBA比色法，MDA Assay Kit)又称脂质氧化(MDA)检测试剂盒，是采用一种基于MDA和硫代巴比妥酸(thiobarbituric acid, TBA)反应产生红色产物的显色反应，广泛用于脂质氧化(lipid peroxidation)水平检测。丙二醛在较高温度及酸性环境中可与TBA发生反应，形成红色的MDA-TBA加合物，MDA-TBA加合物在535nm处有最da吸收，据此可以通过比色法进行检测。 MDA试剂盒是一种改进型的微量、快速、简便、准确、无毒害的测试方法。通过测试可反映出细胞、细胞培养上清、血清、血浆、乳汁等细胞外液、红细胞、白细胞以及各种动植物的细胞水平的脂质过氧化物的量。本试剂盒仅用于科研领域，不能用于临床诊断或其他用途。 机体通过酶系统与非酶系统产生氧自由基，后者能攻击生物膜中的多不饱和脂肪酸（polyunsaturated fatty acid, PUFA），引发脂质过氧化作用，并因此形成脂质过氧化物。如：醛基（丙二醛MDA）、酮基、羟基、羰基、氢过氧基或内过氧基，以及新的氧自由基等。脂质过氧化作用不仅把活性氧转化成活性化学剂，即非自由基性的脂类分解产物，而且通过链式或链式支链反应，放大活性氧的作用。因此，初始的一个活性氧能导致很多脂类分解产物的形成，这些分解产物中，一些是无害的，另一些则能引起细胞代谢及功能障碍，甚至死亡。氧自由基不但通过生物膜中多不饱和脂肪酸（PUFA）的过氧化引起细胞损伤，而且还能通过脂氢过氧化物的分解产物引起细胞损伤。 因而测试MDA的量常常可反映机体内脂质过氧化的程度，间接地反映出细胞损伤的程度。MDA的测定常常与SOD的测定相互配合，SOD活力的高低间接反应了机体清除氧自由基的能力，而MDA的高低又间接反应了机体细胞受自由基攻击的严重程度。 可以提供各种细胞分析试剂盒。包括细胞凋亡、活性、增殖、毒性、活性氧、周期、细胞代谢、氧化应激、膜流动性、膜电位、膜通透性转换孔、细胞耗氧率、胞外酸化、细胞内pH、细胞粘附、细胞自噬等数百种细胞检测试剂盒产品。 可以为您提供各种细胞成像、细胞示踪与追踪试剂盒产品。包括各种颜色的M系列、N系列、L系列、E系列、G系列等细胞膜、细胞质、细胞核、溶酶体、线粒体、内质网、高尔基体、骨架、微管等细胞、细胞亚结构荧光染色试剂盒产品，以及钙离子、钠离子、氩离子等各种荧光染色试剂盒产品。

保存温度

2-8℃ 避光

注意事项

开盖后组份按要求条件保存。

有效期

一年

检测方法

微孔板，酶标仪

适用样本

血清血浆/组织/细胞

产品特点

1.本试剂盒中试剂均无刺激性气味，对操作人员无任何毒害。

2.快速准确，操作简便，每小时可测100例以上样本。

3.灵敏度高，血清或血浆样品只需0.1 ml，或者更少。

4.再现性好，变异系数CV=1.5%，同一份标本数次测试结果相关极微。

5.呈色稳定，呈色后一天内测吸光度不变。

6.血清样品放置40℃，3~5天内测试结果不变。—70℃以下可保存个月至半年。

7.测试面广，可测血清、血浆、各种组织匀浆，培养细胞等。

8.不需昂贵与特殊仪器，只需恒温水浴箱或铝锅、铝盆开盖煮沸，及721、722、751、752分光光度计任一型号均可。

9.稳定，不受气温等外界因素的影响。

产品应用

微孔板，酶标仪

仪器准备

1.酶标仪

2.恒温水浴锅

3.离心机

4.移液器

5.冰箱

6.冰盒

试剂准备

1.生理盐水

2.双蒸水

3.PBS缓冲液

4.蛋白定量试剂盒

耗材准备

1.离心管

2.吸头

3.一次性手套

4.96孔板

使用注意事项

1.必须使用干净的试管。

2.配制试剂时要充分混匀，加样或加试剂时要垂直加入试剂中，避免加到管壁。

3.水浴时间和温度必须固定。

4.血浆、血清或尿液样品制备后可以直接用于MDA测定。

5.组织或细胞可以使用PBS或裂解液进行匀浆或裂解。对于组织，组织重量占匀浆液或裂解液的比例为10%；对于细胞，每100万细胞使用0.1ml裂解液或匀浆液。匀浆或裂解后，1600g离心10分钟取上清用于后续测定。匀浆或裂解等样品制备步骤宜在冰浴或4℃进行操作。

6.对于组织或细胞样品，样品准备完毕后可以用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度，以便于后续计算单位蛋白重量组织或细胞内的MDA含量。

7.95℃水浴最hao用带盖试管，如无带盖试管，可用保鲜膜扎口，水浴时用针扎一小孔。

8.试剂A温度低时会凝固，使用前水浴加热溶解至透明。

9.测定样品吸光度值较低时，可将水浴延长至80min，但应同时延长，以免造成批间差异。

10.避免使用EDTA、枸橼酸、氟化钠、草酸等抗凝剂。

11.待测样本如不能及时测定，应置于-20℃保存，4天内稳定。

使用方法

样品测定：

1. 样品处理

①血清、血浆、尿液、脑脊液样本：从待测样本中分理出的血清或血浆不应有溶血，直接检测，如超过线性范围，用生理盐水或者PBS稀释后检测。

②组织、细胞等样本：组织或细胞可以使用PBS的RIPA裂解液等进行匀浆或裂解。

匀浆或裂解组织时，组织重量占匀浆液或裂解液的比例应为10%；

对于细胞，每106 个细胞使用0.1 ml裂解液或匀浆液。匀浆或裂解后，1600×g离心10 min，取上清用于后续测定。

匀浆或裂解等样品制备步骤宜在冰浴或4℃进行操作。

样品准备完毕后可以用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度，以便于后续计算单位蛋白重量组织或细胞内的MDA含量。

2. 试剂配制：

TBA工作液的配制： 称取适量TBA，用TBA稀释液配制成浓度为0.68%的TBA工作液。TBA工作液需完全溶解后再使用，可以加热到60－70℃促溶，并可通过反复剧烈Vortex促溶。

配制好的TBA工作液4℃避光保存，1个月内有效。

3. 稀释标准品：

取适量MDA标准品（1mM）用恰当溶液稀释至1、2、5、10、20、50 μM（如果进行简易快速检测，标准品直接稀释10 μM）。

4. MDA检测工作液的配制：临检测前，根据待测定的样品数(含对照)，参考下表新鲜配制适量的MDA检测工作液。

5. 样品测定:

离心管或其它适当容器内加入0.1 ml匀浆液、裂解液、PBS、生理盐水等适当溶液作为空白对照。加入0.1 ml 上述不同浓度标准品用于制作标准曲线，加入0.1 ml样品用于测定；随后加入4.14 ml MDA检测工作液。

在带盖试管中按下表配制检测反应体系：

6. 混匀, 加盖，95℃水浴煮沸40 min，加热时务必注意避免液体暴沸溅出。如果使用加热块(Heat block)进行加热注意用重物压紧离心管盖；如果使用沸水浴，则需使用可把盖子锁死的离心管或螺旋盖离心管，或用Parafilm封住离心管口，用针头刺一小孔。最方便和准确的加热方法是使用带有热盖并可以加热金属浴。

7. 水浴或流水冷却至室温。

8. 在3000×g离心15分钟或4000×g离心10分钟。

9. 取上清，双蒸水调零，用酶标仪检测535 nm处吸光值。96孔板每孔加200 μl上清液。分别记为A空白、A标准、A样品。

结果计算：

对于血浆、血清或尿液等样品可以直接根据标准曲线计算；也可以简易快速检测方法，采用如果进行简易快速检测，直接以10 μM标准品进行计算，获得MDA的摩尔浓度。

对于细胞、或组织样品，计算出样品溶液中的MDA含量后，可以通过单位重量的蛋白含量或组织重量等来表示最初样品中的MDA含量，例如μmol/g蛋白或组织。

简易快速血清、血浆、尿液等液体样品中MDA含量计算公式：

血清中MDA含量（μmol/L）

=（A样品-A空白）÷（A标准-A空白）×10 × 样品测试前稀释倍数

简易快速细胞、组织样品中MDA含量计算公式：

组织细胞中MDA含量（μmol/g）

=（A样品-A空白）÷（A标准-A空白）× 10 ÷ 样品蛋白浓度（mg/ml）

式中：

A样品=样品孔的吸光度

A标准=标准孔的吸光度

A空白=空白孔的吸光度

参考区间：

健康成年人血清MDA：9.58±2.15 μmol/L 血浆MDA：7.31±1.27 μmol/L

参考取样量：

血清（浆）尿液取0.1 ml；

低密度脂蛋白悬液取0.1~0.2 ml。

食用油取0.03 ml；

细胞悬液细胞上清0.1~0.2 ml。

肝组织、心肌、肌肉组织等，取5%或10%匀浆0.1~0.2 ml较好。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！