活性氮（RNS）检测试剂盒-蓝色荧光

活性氮（RNS）检测试剂盒-蓝色荧光

产品概述

活性氮（reactive nitrogen species，RNS）是指NO与包括活性氧在内的化合物相互作用,生成一系列包括ONOO•及其质子形式过氧亚硝酸(HOONO)等具有高度氧化活性的自由基和硝基类化合物,这些与活性氧相对应的以NO为中心的衍生物称为活性氮。活性氮主要包括氮氧化物一氧化氮（NO）和二氧化氮（NO2）、过氧化亚硝酰阴离子（ONOO•）、亚硝酰氢（HNO）、亚硝酸根离子（NO2-）和氨等。 活性氮检测试剂盒是一种利用荧光探针O51进行活性氮检测的试剂盒。O51探针可以自由穿过细胞膜，进入细胞内后，在活性氮存在的条件下，O51与活性氮反应生成强荧光物质，发出的蓝色荧光强度与细胞内活性氮水平成正比，检测荧光就可以知道细胞内活性氮的水平。O51荧光最da激发波长是364nm，最da发射波长是406nm。 活性氮检测试剂具有高的灵敏度，良好的选择性，短的响应时间，以及可对检测对象在原位进行实时监控和观察等。更重要的是，这种检测技术对细胞内活性氮的内源性分布不产生巨大的外加干扰，从而能最da程度地得到内源性活性氮变化的真实信息。 使用荧光显微镜、激光共聚焦显微镜、荧光分光光度计、荧光酶标仪、流式细胞仪等检测O51荧光，从而测定细胞内活性氮水平。 本试剂盒可以用于各种真核培养细胞的检测。 可以提供细胞凋亡、增殖、毒性、活性氧、细胞代谢、氧化应激、细胞膜流动性、膜通透性转换孔、细胞耗氧率、细胞内pH、细胞粘附、细胞自噬等数百种检测试剂盒产品。 可以为您提供各种颜色的M系列、N系列、L系列、E系列、G系列等细胞膜、细胞质、细胞核、溶酶体、线粒体、内质网、高尔基体、骨架、微管等细胞、细胞亚结构荧光染色试剂盒产品，以及钙离子、钠离子、氩离子等各种荧光染色试剂盒产品。 可以提供动物、植物、微生物、酵母、水产、家禽、兽类、土壤等样本的各种生化指标检测的数百种试剂盒产品。

保存温度

-20℃ 避光

注意事项

1.避免反复冻融。

2.可以根据需要分装后冻存。

3.探针为DMSO溶液，在2-8℃时是固体状态，冬季气温较低时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热融解，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。

有效期

6个月

检测方法

1.流式细胞仪2.荧光显微镜3.激光共聚焦

适用样本

1.悬浮细胞

2.贴壁细胞

产品特点

1.使用方便：可用激光共聚焦显微镜直接观察、荧光分光光度计、荧光酶标仪或流式细胞仪检测；

2.背景低，灵敏度高；

3.线性范围宽，使用方便。

仪器准备

1.激光共聚焦显微镜或荧光分光光度计或酶标仪或流式细胞仪，

2.离心机

3.移液器

4.冰箱

5.冰盒

试剂准备

PBS缓冲液或者HBSS

耗材准备

1.离心管

2.吸头

3.一次性手套

4.荧光检测专用黑色96孔板

使用注意事项

1.螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体收集至管底，避免开盖时液体洒落。

2.荧光探针标记后，一定要洗净残余的未进入细胞内的探针，否则会导致背景较高。

3.探针标记完毕并洗净残余探针后，可以进行激发波长的扫描和发射波长的扫描，以确认探针的标记情况是否正常。

4.尽量缩短探针标记后到测定所用的时间，以减少各种可能的误差。

5.对于药物作用时间较短(小于2小时)的细胞，可以先标记探针，后用药物刺激细胞。对于药物作用时间较长(6小时以上)的细胞，先用相应的药物刺激细胞，后标记探针。

6.O51染色液为DMSO溶液，冬季气温较低时在室温时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热溶解，吸头也需要放在培养箱预热，否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。

7.使用前，先将本品取出回温至室温，并对其进行简短离心使DMSO溶液集中于管底。

8.细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。

9.标记的条件因细胞种类而异，根据不同样本的实际染色结果做相应调整，在每次实验前，请先根据不同的实验要求、细胞类型、细胞的膜通透性等进行优化，确定最jia条件。以下方法仅供参考。

10.一般原位染色的浓度需要高于收集后染色浓度。

11.染色后立即进行分析。

12.以下步骤仅做为参考，稀释比例和孵育时间可根据实际情况来调整。比如，对于某些细胞，如果发现未被刺激的阴性对照细胞荧光也比较强，可降低探针浓度。如果发现用感兴趣的药物刺激后荧光较弱，可升高O51探针浓度，以提高检测的灵敏度。另外，探针装载的时间也可以根据情况在15-60分钟内适当进行调整，孵育温度在4℃-37℃内调整。

使用方法

探针染色工作液配制：

根据样本数量，用HBSS将O51荧光染料1000-5000倍稀释，配制成染色工作液。

细胞探针标记：

对于贴壁细胞，可以进行原位标记

1. 培养皿/培养板准备细胞样本。

2. 待细胞生长到合适丰度，吸除培养液，加入适量37℃预热的含探针工作液。于生长状态下孵育20分钟～60分钟（具体孵育时间需根据细胞类型而定，需预实验优化）。

3. 移除染色液，用PBS（pH7.4）洗涤细胞3次。

4. 加入200 μl HBSS缓冲液。

5. 荧光显微镜（含合适滤片）或流式细胞仪、荧光酶标仪下观察。最da激发/发射波长为364 nm / 406 nm。

对于悬浮细胞

1. 待检测细胞离心，吸除上清。

2. 用PBS洗涤细胞2次.

3. 利用37℃预热的探针工作液100-200 μl重悬细胞，于生长状态下孵育20分钟～60分钟（具体时间需根据细胞类型而定，需预实验优化）。

4. 离心，吸除染色液，加入PBS（pH7.4）重悬细胞，洗涤3次。

5. 加入适量缓冲液重悬细胞。

6. 流式细胞仪、荧光酶标仪检测。最da激发/发射波长为364 nm / 406 nm。

检测：

对于原位标记探针的样品可以用荧光显微镜，激光共聚焦显微镜直接观察，或收集细胞后用荧光分光光度计、荧光酶标仪或流式细胞仪检测。

对于悬浮细胞或者收集细胞后标记探针的样品可以用荧光分光光度计、荧光酶标仪或流式细胞仪检测，用激光共聚焦显微镜直接观察亦可。

使用364nm激发波长，406nm发射波长，实时或逐时间点检测刺激前后荧光的强弱。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！