超氧阴离子（O2•-）检测试剂盒-绿色荧光

产品概述

超氧阴离子（O2•-）检测试剂盒是一种利用超氧阴离子特异性荧光探针O76进行超氧阴离子检测的试剂盒。 O76可自由透过活细胞膜进入细胞内，并被细胞内的超氧阴离子（O2•-）氧化，产生绿色荧光产物。绿色荧光强度与细胞内超氧阴离子水平成正比，检测O76产物的荧光就可以知道细胞内超氧阴离子的水平。 根据活细胞中绿色荧光的差异，可以判断细胞O2•-含量的多少和变化。是一种快速简便的培养活细胞中超氧阴离子检测方法。在激发波长506 nm，发射波长526 nm附近，使用荧光显微镜、激光共聚焦显微镜、荧光分光光度计、荧光酶标仪、流式细胞仪等检测荧光，从而测定细胞内超氧阴离子（O2•-）水平。 活性氧(Reactive oxygen species, ROS) 包括过氧化氢（H2O2，Hydrogen peroxide）、羟基自由基（•OH，Hydroxyl radical）、单线态氧（1O2，Singlet oxygen）、一氧化氮（NO，Nitric oxide）、超氧阴离子(•O2-，Superoxide anion)、过氧化自由基(ROO• ，Peroxyl radical)、过氧羟自由基（HOO• ，hydroperoxyl）及其下游产物过氧化物过氧亚硝基阴离子（ONOO-，Peroxynitrite anion）、ClO-和羟化物等，参与细胞生长增殖、发育分化、衰老和凋亡以及许多生理和病理过程。 活性氧(reactive oxygen species,ROS)的产生主要是氧化磷酸化的结果，在呼吸链中，在某些位点会有“泄露”的电子直接和氧气或和其他电子受体反应，在酶或非酶作用下引发一系列反应生成不同种类的活性氧：“泄露”的电子最初和氧气反应生成超氧阴离子自由基(O2•-)(图1A)。超氧阴离子遇水生成H2O2(图1B)，同时过氧化氢也可由氧气在单胺氧化酶(monoamine oxidase,MAO)的作用下生成(图1C)，生成的过氧化氢在髓过氧化物酶(myeloperoxidase, MPO)的催化下与Cl-反应可生成ClO-(图1D)，在铁或铜离子的催化下发生Fenton反应生成OH•(图1E)，超氧阴离子遇氮氧化物反应生成ONOO-(图1F)。这些生成的高氧化活性的物质统称为活性氧。 除了本绿色荧光检测试剂盒外，还可以提供红色荧光的超氧阴离子检测试剂。 可以为您提供各种细胞样本、切片样本、组织样本的活性氧、活性氮等各种颜色的检测试剂盒产品。 可以提供细胞凋亡、增殖、毒性、活性氧、细胞代谢、氧化应激、细胞膜流动性、膜通透性转换孔、细胞耗氧率、细胞内pH、细胞粘附、细胞自噬等数百种检测试剂盒产品。 可以为您提供各种颜色的M系列、N系列、L系列、E系列、G系列等细胞膜、细胞质、细胞核、溶酶体、线粒体、内质网、高尔基体、骨架、微管等细胞、细胞亚结构荧光染色试剂盒产品，以及钙离子、钠离子、氩离子等各种荧光染色试剂盒产品。 可以提供动物、植物、微生物、酵母、水产、家禽、兽类、土壤等样本的各种生化指标检测的数百种试剂盒产品。

保存温度

-20℃ 避光

注意事项

1.避免反复冻融。

2.可以根据需要分装后冻存。

3.探针为DMSO溶液，在2-8℃时是固体状态，冬季气温较低时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热融解，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。

有效期

6个月

检测方法

1.流式细胞仪2.荧光显微镜3.激光共聚焦

适用样本

1.悬浮细胞

2.贴壁细胞

产品特点

1.使用方便：可用激光共聚焦显微镜直接观察、荧光分光光度计、荧光酶标仪或流式细胞仪检测；

2.背景低，灵敏度高；

3.线性范围宽，使用方便。

仪器准备

1.激光共聚焦显微镜或荧光分光光度计或酶标仪或流式细胞仪，

2.离心机

3.移液器

4.冰箱

5.冰盒

试剂准备

PBS缓冲液或者HBSS

耗材准备

1.离心管

2.吸头

3.一次性手套

4.荧光检测专用黑色96孔板

使用注意事项

1.螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体收集至管底，避免开盖时液体洒落。

2.荧光探针标记后，一定要洗净残余的未进入细胞内的探针，否则会导致背景较高。

3.探针标记完毕并洗净残余探针后，可以进行激发波长的扫描和发射波长的扫描，以确认探针的标记情况是否正常。

4.尽量缩短探针标记后到测定所用的时间，以减少各种可能的误差。

5.O76探针在光照和空气中易被氧化，注意避光密封保存。

6.对不同的细胞，应选择合适的孵育时间和浓度，以观察超氧阴离子（O2•-）的变化。

使用方法

O76探针标记：

1. O76溶液可在新鲜无血清培养基、HBSS缓冲液、PBS缓冲盐溶液稀释到所需浓度，200-500倍稀释，以此染色工作液更换细胞培养基；也可直接向细胞孵育液体中加入O76探针溶液至所需浓度。

2. 依据细胞超氧阴离子含量的不同，O76终浓度可选择在200-500倍稀释的范围，孵育时间可选择10-90 分钟，在37℃或室温进行避光孵育。

3. 孵育结束后，用新鲜溶液清洗细胞。

4. 用相关仪器进行荧光检测。

对于原位标记探针的样品可以用激光共聚焦显微镜直接观察，或收集细胞后用荧光分光光度计、荧光酶标仪或流式细胞仪检测。

对于收集细胞后标记探针的样品可以用荧光分光光度计、荧光酶标仪或流式细胞仪检测，用激光共聚焦显微镜直接观察也可以。

使用488 nm激发波长，526 nm发射波长，实时或逐时间点检测刺激前后荧光的强弱变化。

荧光显微镜检测：

1. 对贴壁生长细胞，可直接在荧光显微镜下观察；对悬浮生长细胞，取25-50 μl细胞悬液滴到一张显微载玻片上，再盖上一张盖玻片。

2. 荧光显微镜下，用蓝光或绿光激发，观察和拍摄细胞绿色发射图像，超氧阴离子阳性细胞在整个核区被染成绿色.

流式细胞仪分析：

1. 对贴壁生长细胞，用胰酶消化制备成单细胞悬液；对悬浮生长细胞，直接收集细胞。用0.5~1 ml冰冷PBS重悬细胞（5~10万）。

2. 采用480~535 nm波长激发，测定526 nm的发射，细胞可能分成两个亚群：超氧阴离子（O2•-）阴性细胞仅有很低的荧光强度，超氧阴离子阳性细胞有较强的绿色荧光。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！