单线态氧检测试剂盒-绿色荧光

产品概述

活性氧(Reactive oxygen species, ROS) 包括过氧化氢（H2O2，Hydrogen peroxide）、羟基自由基（•OH，Hydroxyl radical）、单线态氧（1O2，Singlet oxygen）、一氧化氮（NO，Nitric oxide）、超氧阴离子(•O2-，Superoxide anion)、过氧化自由基(ROO• ，Peroxyl radical)、过氧羟自由基（HOO• ，hydroperoxyl）及其下游产物过氧化物过氧亚硝基阴离子（ONOO-，Peroxynitrite anion）、ClO-和羟化物等，参与细胞生长增殖、发育分化、衰老和凋亡以及许多生理和病理过程。 活性氧(reactive oxygen species,ROS)的产生主要是氧化磷酸化的结果，在呼吸链中，在某些位点会有“泄露”的电子直接和氧气或和其他电子受体反应，在酶或非酶作用下引发一系列反应生成不同种类的活性氧：“泄露”的电子最初和氧气反应生成超氧阴离子自由基(O2•-)(图1A)。超氧阴离子遇水生成H2O2(图1B)，同时过氧化氢也可由氧气在单胺氧化酶(monoamine oxidase,MAO)的作用下生成(图1C)，生成的过氧化氢在髓过氧化物酶(myeloperoxidase, MPO)的催化下与Cl-反应可生成ClO-(图1D)，在铁或铜离子的催化下发生Fenton反应生成OH•(图1E)，超氧阴离子遇氮氧化物反应生成ONOO-(图1F)。这些生成的高氧化活性的物质统称为活性氧。 单线态氧检测试剂盒是利用单线态氧特异性荧光探针单线态氧探针O23检测单线态氧的试剂盒。单线态氧探针O23是合成的苯蒽类荧光探针，可以自由穿过细胞膜，进入细胞内后，与细胞内单线态氧反应，被氧化生成绿色荧光物质，绿色荧光强度与细胞内单线态氧水平成正比，检测绿色荧光就可以知道细胞内单线态氧的变化情况。 在激发波长488 nm，发射波长516 nm附近，使用荧光显微镜、激光共聚焦显微镜、荧光分光光度计、荧光酶标仪、流式细胞仪等检测绿色 荧光，从而测定细胞内单线态氧水平。 可以提供O21细胞膜不透性的单线态氧荧光探针，其不能穿过细胞膜，需要借助破膜剂进入细胞后与细胞内的单线态氧反应。O21可以用于液体的单线态氧检测。 还可以为您提供各种细胞样本、冰冻切片样本的活性氧、活性氮等各种颜色的检测试剂盒产品。

保存温度

-20℃ 避光

注意事项

1.避免反复冻融。

2.可以根据需要分装后冻存。

3.探针为DMSO溶液，在2-8℃时是固体状态，冬季气温较低时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热融解，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。

有效期

1年

检测方法

1.流式细胞仪2.荧光显微镜3.激光共聚焦

适用样本

1.悬浮细胞

2.贴壁细胞

产品特点

1.使用方便：可用激光共聚焦显微镜直接观察、荧光分光光度计、荧光酶标仪或流式细胞仪检测；

2.背景低，灵敏度高；

3.线性范围宽，使用方便。

仪器准备

1.激光共聚焦显微镜或荧光分光光度计或酶标仪或流式细胞仪，

2.离心机

3.移液器

4.冰箱

5.冰盒

试剂准备

PBS缓冲液或者HBSS

耗材准备

1.离心管

2.吸头

3.一次性手套

4.荧光检测专用黑色96孔板

使用注意事项

1.螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体收集至管底，避免开盖时液体洒落。

2.荧光探针标记后，一定要洗净残余的未进入细胞内的探针，否则会导致背景较高。

3.探针标记完毕并洗净残余探针后，可以进行激发波长的扫描和发射波长的扫描，以确认探针的标记情况是否正常。

4.尽量缩短探针标记后到测定所用的时间，以减少各种可能的误差。

5.单线态氧O23在光照和空气中易被氧化，注意避光密封保存。

6.O23染色工作液必须现配现用，并且在当天用完。

7.O23对湿度非常敏感，若是O23溶液每次取完需要量后，必须紧紧密封盖子。建议根据单次用量，分装密封保存。不可使用含水的吸头。

8.对不同的细胞和组织，应选择合适的孵育时间和浓度，以观察单线态氧的变化，很多细胞内的单线态氧绝dui水平较低，需要根据实际情况适当延长孵育时间。

9.单线态氧O23探针可以根据需要的用量分装后冻存，避免反复冻融。

10.单线态氧O23不可以一次性全部稀释后长期保存不用，稀释后稳定性变差，有效期缩短。

使用方法

单线态氧探针O23配制：

根据样本数量计算需要的用量，用探针稀释液5倍稀释单线态氧O23探针后充分混匀，避光保存备用。

稀释后的单线态氧O23荧光探针最hao在一个月内用完，尽量避免反复冻融。

单线态氧O23探针标记：

1. 单线态氧O23溶液可在新鲜无血清培养基、HBSS缓冲盐溶液或灌流液中稀释到所需浓度，终浓度按试剂盒的母液的100-200倍稀释，以此染色液更换细胞培养液或灌流液；也可直接向无血清细胞孵育液体或灌流液中加入单线态氧O23探针溶液至所需浓度。

2. 依据细胞单线态氧含量的不同，单线态氧O23探针终浓度可选择在100-200倍稀释的范围，孵育时间可选择1-4小时，在37℃或室温进行避光孵育。

3. 孵育结束后，用PBS等新鲜溶液清洗细胞。漂洗时间要短。

荧光显微镜观察：

1. 对贴壁生长细胞，可直接在荧光显微镜下观察；对悬浮生长细胞，取25-50 μl细胞悬液滴到一张显微载玻片上，再盖上一张盖玻片。

2. 荧光显微镜下观察。

流式细胞仪分析：

1. 对贴壁生长细胞，用胰酶消化制备成单细胞悬液；对悬浮生长细胞，直接收集细胞。用0.5~1 ml冰冷PBS重悬细胞（5~10万）。

2. 采用488nm波长激发，测定待测细胞平均荧光强度。使用488 nm激发波长，516 nm发射波长，实时或逐时间点检测刺激前后荧光的强弱。探针O23的荧光光谱和FITC非常相似，可以用FITC的参数设置检测探针O23产物。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！