DHR-ROS活性氧检测试剂盒

产品概述

活性氧(Reactive oxygen species, ROS) 包括超氧自由基、过氧化氢、及其下游产物过氧化物和羟化物等，参与细胞生长增殖、发育分化、衰老和凋亡以及许多生理和病理过程。 DHR活性氧检测试剂盒是一种利用荧光探针DHR进行活性氧检测的试剂盒。DHR可自由透过活细胞膜进入细胞内，并被细胞内的ROS氧化，形成发绿色荧光的Rho123，并稳定存在于细胞内。根据活细胞中荧光的产生，可以判断细胞ROS含量的多少和变化。用流式细胞仪或荧光显微镜可直接观察，是一种快速简便的活细胞中ROS经典检测方法。 用488nm激发，使用荧光显微镜、激光共聚焦显微镜、荧光分光光度计、荧光酶标仪、流式细胞仪等检测荧光，从而测定细胞内活性氧水平。 可以提供细胞凋亡、增殖、毒性、活性氧、细胞代谢、氧化应激、细胞膜流动性、膜通透性转换孔、细胞耗氧率、细胞内pH、细胞粘附、细胞自噬等数百种检测试剂盒产品。 可以为您提供各种颜色的M系列、N系列、L系列、E系列、G系列等细胞膜、细胞质、细胞核、溶酶体、线粒体、内质网、高尔基体、骨架、微管等细胞、细胞亚结构荧光染色试剂盒产品，以及钙离子、钠离子、氩离子等各种荧光染色试剂盒产品。 可以提供动物、植物、微生物、酵母、水产、家禽、兽类、土壤等样本的各种生化指标检测的数百种试剂盒产品。

保存温度

-20℃ 避光

注意事项

1.避免反复冻融。

2.可以根据需要分装后冻存。

3.探针为DMSO溶液，在2-8℃时是固体状态，冬季气温较低时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热融解，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。

有效期

6个月

检测方法

1.流式细胞仪2.荧光显微镜3.激光共聚焦

适用样本

1.悬浮细胞

2.贴壁细胞

产品特点

1.使用方便：可用激光共聚焦显微镜直接观察、荧光分光光度计、荧光酶标仪或流式细胞仪检测；

2.背景低，灵敏度高；

3.线性范围宽，使用方便。

仪器准备

1.激光共聚焦显微镜或荧光分光光度计或酶标仪或流式细胞仪，

2.离心机

3.移液器

4.冰箱

5.冰盒

试剂准备

PBS缓冲液或者HBSS

耗材准备

1.离心管

2.吸头

3.一次性手套

4.荧光检测专用黑色96孔板

使用注意事项

1.螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体收集至管底，避免开盖时液体洒落。2.荧光探针标记后，一定要洗净残余的未进入细胞内的探针，否则会导致背景较高。

3.探针标记完毕并洗净残余探针后，可以进行激发波长的扫描和发射波长的扫描，以确认探针的标记情况是否正常。

4.尽量缩短探针标记后到测定所用的时间，以减少各种可能的误差。

5.原位检测必须使用荧光检测专用的黑色透明底96孔细胞培养板。

6.以下操作步骤仅供参考，请根据实际样本情况调整或参考文献。

使用方法

DHR探针配制：

1. DHR探针可在新鲜无血清培养基、各种缓冲盐溶液中稀释到所需浓度，500-1000倍稀释，以此染色工作液更换细胞培养基；也可直接向细胞培养基中加入DHR探针溶液至所需浓度。

2. 依据细胞ROS含量的不同，DHR终浓度可选择在500-1000倍稀释的范围，孵育时间可选择20-120 分钟，在37℃或室温进行避光孵育。

DHR探针标记：

原位标记：仅适用于贴壁培养细胞。

1. 按照1:500-1000用无血清培养基稀释DHR探针。

2. 去除细胞培养基，用PBS洗细胞一次。

3. 加入适当体积稀释好的DHR探针。加入的体积以能充分盖住细胞为宜，通常对于96孔板每孔加入100-200μl染色液，六孔板的一个孔加入稀释好的DHR探针不少于1毫升。

4. 在37℃细胞培养箱内避光孵育20-120分钟。

5. 用无血清细胞培养液洗涤细胞三次，以充分去除未进入细胞内的DHR探针。

收集后标记：悬浮细胞或贴壁细胞消化处理

1. 按照1:1000用无血清培养基稀释DHR探针。

2. 离心移除培养基，用PBS洗细胞一次。

3. 细胞收集后悬浮于稀释好的DHR探针中，细胞浓度为1*106-2*107/毫升，37℃细胞培养箱内避光孵育20-120分钟。每隔3-5分钟颠倒混匀一下，使探针和细胞充分接触。

4. 用无血清细胞培养基洗涤细胞三次，以充分去除未进入细胞内的DHR探针。

5. 用无血清细胞培养基重悬细胞。

荧光显微镜检测：

1. 对贴壁生长细胞，可直接在荧光显微镜下观察；对悬浮生长细胞，取25-50μl细胞悬液滴到一张显微载玻片上，再盖上一张盖玻片。

2. 荧光显微镜下，用蓝光激发，观察和拍摄细胞绿色发射图像，ROS阳性细胞在整个核区被染成绿色。

流式细胞仪分析：

1. 对贴壁生长细胞，用胰酶消化制备成单细胞悬液；对悬浮生长细胞，直接收集细胞。用0.5~1 ml冰冷PBS重悬细胞（5~10万）。

2. 采用488nm波长激发，测定待测细胞平均荧光强度。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！