过氧化氢酶（CAT）检测试剂盒（微板，紫外）

产品概述

过氧化氢酶（CAT）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，是最主要的H2O2清除酶，在活性氧清除系统中具有重要作用。 过氧化氢酶(Catalase，CAT)又称触酶，是一类以铁卟啉为辅基的结合酶，由四个相同亚单位组成的四聚体酶，共含4分子的亚铁血红素作为辅基，分子量约为24KD。CAT能将细胞代谢产生的毒性物质过氧化氢迅速清除，可与GSH-Px共同保护巯基酶、膜蛋白、过氧化氢解离。 过氧化氢酶（CAT）检测试剂盒（微板法）检测原理是在最jia酶反应条件下，CAT能够分解H2O2，H2O2在240nm下有特征吸收峰，CAT使反应溶液240nm下的吸光度随反应时间而下降，根据吸光度的变化率可计算出CAT活性。 可以提供细胞凋亡、增殖、毒性、活性氧、细胞代谢、氧化应激、细胞膜流动性、膜通透性转换孔、细胞耗氧率、细胞内pH、细胞粘附、细胞自噬等数百种检测试剂盒产品。 可以为您提供各种颜色的M系列、N系列、L系列、E系列、G系列等细胞膜、细胞质、细胞核、溶酶体、线粒体、内质网、高尔基体、骨架、微管等细胞、细胞亚结构荧光染色试剂盒产品，以及钙离子、钠离子、氩离子等各种荧光染色试剂盒产品。 可以提供动物、植物、微生物、酵母、水产、家禽、兽类、土壤等样本的各种生化指标检测的数百种试剂盒产品。

保存温度

2-8℃避光

注意事项

开盖后组份按要求条件保存。

有效期

3个月

检测方法

酶标仪

适用样本

血清、血浆、组织

仪器准备

1. 酶标仪

2. 恒温水浴锅

3. 涡旋混匀器

4. 离心机

5. 移液器

6. 冰箱

7. 冰盒

试剂准备

纯水

耗材准备

1.96孔板

2.吸头

3.一次性手套

使用注意事项

1. 测定血清和血浆时，如果样本不溶血，每批样本只需要随机挑选2个样本做空白或者用双蒸水代替样本做空白；如果样本溶血的话，必须每个样本做空白对照。

2. 测定全血时，必须每个样本都设定空白对照；

3. 测定组织匀浆时，如果样本不是高脂，每批样本只需随机挑选2个样本做空白或者用双蒸水代替样本做空白；如果样本高脂的话，必须每个样本做空白对照；

4. 所有实验用水均需使用纯水或双蒸水。

5. 需使用一次性塑料试管，若没有，使用较新的玻璃管并彻底洗刷干净。

6. 试剂D天冷后会凝固，待 37℃水浴变澄清时再使用。

使用方法

酶液提取： 1. 细胞或组织样品的制备：

（1）培养细胞：

先收集细胞到离心管内，离心后弃上清；

按照细胞数量 （104个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细胞加入 1mL 提取液），超声波破碎细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）； 8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

（2）组织：

按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织， 加入 1mL 提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

2. 血清（浆）样品：直接检测。

CAT测定：

1. 酶标仪预热30min 以上，检测波长240nm，蒸馏水调零。

2. 测定前将CAT 检测工作液在37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）水浴10min 以上。

3. 准备96 孔UV 板一块。

【注】：

非普通酶标板，普通酶标板只能透过可见光，不能透过紫外光，检测波长小于340nm 务必使用UV 板。

4. 在96 孔UV 板中加入10μL 待测样本和190μL 工作液，充分混匀，记录240nm下初始吸光值A1 和1min 后的吸光值A2。

5. 计算ΔA＝A1-A2。

CAT活力计算：

1. 血清（浆）中CAT活力计算：

单位的定义：每毫升血清（浆）每分钟催化1nmol H2O2降解定义为一个酶活力单位。

CAT(nmol/min/mL)=[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷V样÷T

=918×ΔA

2. 组织、细胞中 CAT 活力计算：

（1）按样本蛋白浓度计算：

单位的定义：每 mg 组织蛋白每分钟催化 1nmol H2O2降解定义为一个酶活力单位。

CAT(nmol/min /mg prot)=[ΔA×V反总÷（ε×d）×109 ]÷(V样×Cpr) ÷T

=918×ΔA÷Cpr

（2）按样本鲜重计算：

单位的定义：每 g 组织每分钟催化 1nmol H2O2降解定义为一个酶活力单位。CAT(nmol/min /g 鲜重)=[ΔA×V反总÷(ε×d）×109 ]÷(W×V样÷V样总)÷T

=918×ΔA÷W

（3）按细胞密度计算：

单位的定义：每 1 万个细胞每分钟催化 1nmol H2O2降解定义为一个酶活力单位。

CAT(nmol/min /104cell)＝[ΔA×V反总÷（ε×d）×109 ]÷（500×V样÷V样总）÷T =1.836×ΔA

【注】：

V反总：反应体系总体积，2×10-4 L；

ε：H2O2摩尔消光系数，4.36×104 L / mol /cm；

d： 96孔板光径，0.5cm；

V样：加入样本体积，0.01 mL；

V样总：加入提取液体积，1 mL；

T： 反应时间，1 min；

W：样本质量，g；

Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；

500：细胞总数，500 万。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！