一氧化氮检测试剂盒-化学法，Griess法

产品概述

一氧化氮(Nitric Oxide，NO)，是一种非常重要的生理性的细胞内及细胞间的信号分子，在免疫、神经及循环等系统中起着重要作用。一氧化氮化学性质活泼，体内代谢转化为硝酸盐（NO3-）和亚硝酸盐（NO2-）,此两种浓度之和（NO3-＋NO2-）才能准确代表NO水平。 一氧化氮(NO)检测试剂盒利用NO 在体内或水溶液中极易氧化生成NO2—，在酸性条件下，NO2—与重氮盐磺酸胺生成重氮化合物，进一步与萘基乙烯基二胺偶合，产物在550nm 处有特征吸收峰，测定其吸光值，可以计算NO 含量。 本试剂盒检测方法准确性高、灵敏、简便且较稳定，可用于血清、组织匀浆、细胞及细胞培养液等样本的NO浓度测定。 还可以提供细胞内NO检测试剂盒，可以用荧光法快速检测，准确性、灵敏度更高，可以进行原位检测和高通量检测。 可以提供各种细胞检测试剂盒。包括细胞凋亡、增殖、毒性、活性氧、细胞代谢、氧化应激、细胞膜流动性、膜通透性转换孔、细胞耗氧率、细胞内pH、细胞粘附、细胞自噬等数百种检测试剂盒产品。  可以为您提供各种颜色的M系列、N系列、L系列、E系列、G系列等细胞膜、细胞质、细胞核、溶酶体、线粒体、内质网、高尔基体、骨架、微管等细胞、细胞亚结构荧光染色试剂盒产品，以及钙离子、钠离子、氩离子等各种荧光染色试剂盒产品。 可以提供动物、植物、微生物、酵母、水产、家禽、兽类、土壤等样本的各种生化指标检测的数百种试剂盒产品。

保存温度

-20℃ 避光

注意事项

1.开盖后组份按要求条件保存。

2.拆封后请尽快使用完！

有效期

6个月

检测方法

分光光度计

适用样本

血清、血浆、尿液、细胞培养上清、细胞裂解液、组织裂解液

仪器准备

1. 可见分光光度计

2. 天平

3. 钵体或匀浆器

4. 离心机

5. 移液器

6. 1ml玻璃比色皿7. 冰盒

试剂准备

纯水

耗材准备

1.离心管

2.吸头

3.一次性手套

使用注意事项

1.因组织中NO含量较少，组织匀浆一般为10%或20%，且做好的组织匀浆离心速度为2500rpm/min，离心10分钟，转速不可过高，时间不可太长，样本取样量以0.3-0.5ml为宜。

2.血清、血浆、组织等样本应新鲜，或者于-80℃以下保存半年以内检测。

3.所有实验用水均需使用不含NO2-的纯水或双蒸水。

4.样本与底物反应完毕后，离心，取上清时千万不可将沉淀吸出，否者影响结果。

5.需使用一次性塑料试管，若没有，使用较新的玻璃管并彻底洗刷干净。

使用方法

一、试剂配制

1. 试剂B的准备：试剂B使用之前震荡溶解；

2. 试剂C的准备：试剂C使用之前60℃加热震荡15min；

二、样本的处理：

1. 组织：

按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10 的比例（建议称取约0.1g 组织，

加入1mL 提取液A）进行冰浴匀浆。10000g，4℃离心15min，取上清，置冰上待测。

2. 细菌、真菌：

按照细胞数量（104 个）：提取液体积（mL）为500~1000：1 的比例（建议500 万细胞加入1mL 提取液A），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3 秒，间隔7秒，总时间3min）；然后10000g，4℃，离心15min，取上清置于冰上待测。

3. 体液和培养液等其它液态样品：直接测定。

三、操作步骤：

1. 操作表：

四、NO 含量计算

标准曲线回归方程为：y= 0.016x -0.0103，R2= 0. 9986

1、组织样品：

（1）按样本质量计算

NO 含量 =（ΔA +0.0103）÷0.016×V 反总÷（V 样÷V 样总×W）×10-3

（μmoL/g 鲜重）

= 0.14×（ΔA +0.0103）÷W

（2）按样本蛋白浓度计算

NO 含量 =（ΔA +0.0103）÷0.016×V 反总÷（V 样×Cpr）×10-3

（μmoL/mg prot）

= 0.14×（ΔA +0.0103）÷Cpr

2、细胞：

NO 含量 =（ΔA +0.0103）÷0.016×V 反总÷（V 样÷V 样总×细胞数量）×10-3

（μmol/104 cell）

= 0.14×（ΔA +0.0103）÷细胞数量（万个）

3、其他样品：

NO 含量 =（ΔA +0.0103）÷0.016×V 反总÷V 样

（μmoL/L）

= 140×（ΔA +0.0103）

V 反总：反应总体积，0.9mL；

V 样：反应中样品体积，0.4mL；

V 样总：加入提取液体积，1mL；

W：样品质量，g；

Cpr：蛋白浓度，mg/mL

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！