细菌活性氧检测试剂盒--绿色荧光

产品概述

O11细菌活性氧（ROS）检测试剂盒是一种利用荧光探针O11进行活性氧检测的试剂盒。O11探针可自由透过细菌细胞膜进入细胞内，并被细菌细胞内的ROS氧化，产生绿色荧光物质，并稳定存在于细菌胞内。根据细菌细胞中绿色荧光的强弱，可以判断细菌细胞ROS含量的变化情况。 在激发波长488 nm，发射波长526 nm附近，使用荧光分光光度计、荧光酶标仪、荧光显微镜、激光共聚焦显微镜、流式细胞仪等可以检测荧光强度的设备，可以方便测定荧光强度情况，从而测定细菌胞内活性氧水平。 除了本绿色荧光检测的试剂盒以外，还可以提供红色荧光的检测试剂盒（相关产品：BB-461113）以及细菌培养上清的活性氧检测试剂盒。 活性氧(Reactive oxygen species, ROS) 包括过氧化氢（H2O2，Hydrogen peroxide）、羟基自由基（•OH，Hydroxyl radical）、单线态氧（1O2，Singlet oxygen）、一氧化氮（NO，Nitric oxide）、超氧阴离子(•O2-，Superoxide anion)、过氧化自由基(ROO• ，Peroxyl radical)、过氧羟自由基（HOO• ，hydroperoxyl）及其下游产物过氧化物过氧亚硝基阴离子（ONOO-，Peroxynitrite anion）、ClO-和羟化物等，参与细胞生长增殖、发育分化、衰老和凋亡以及许多生理和病理过程。 活性氧(reactive oxygen species,ROS)的产生主要是氧化磷酸化的结果，在呼吸链中，在某些位点会有“泄露”的电子直接和氧气或和其他电子受体反应，在酶或非酶作用下引发一系列反应生成不同种类的活性氧：“泄露”的电子最初和氧气反应生成超氧阴离子自由基(O2•-)(图1A)。超氧阴离子遇水生成H2O2(图1B)，同时过氧化氢也可由氧气在单胺氧化酶(monoamine oxidase,MAO)的作用下生成(图1C)，生成的过氧化氢在髓过氧化物酶(myeloperoxidase, MPO)的催化下与Cl-反应可生成ClO-(图1D)，在铁或铜离子的催化下发生Fenton反应生成OH•(图1E)，超氧阴离子遇氮氧化物反应生成ONOO-(图1F)。这些生成的高氧化活性的物质统称为活性氧。 可以为您提供各种细胞样本、切片样本、组织样本的活性氧、活性氮检测试剂盒产品。 可以为您提供总活性氧、总活性氮和各种亚型的活性氧/活性氮的检测试剂盒产品。 可以为您提供各种绿色、红色、蓝色、深红色的活性氧/活性氮检测试剂盒产品。

保存温度

-20℃ 避光

注意事项

1.避免反复冻融。

2.可以根据需要分装后冻存。

3.探针为DMSO溶液，在2-8℃时是固体状态，冬季气温较低时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热融解，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。

有效期

6个月

检测方法

1.流式细胞仪2.荧光显微镜3.激光共聚焦

适用样本

细菌

产品特点

1.使用方便：可用激光共聚焦显微镜直接观察、荧光分光光度计、荧光酶标仪或流式细胞仪检测；

2.背景低，灵敏度高；

3.线性范围宽，使用方便。

仪器准备

1.激光共聚焦显微镜或荧光分光光度计或酶标仪或流式细胞仪，

2.离心机

3.移液器

4.冰箱

5.冰盒

试剂准备

PBS缓冲液或者HBSS

耗材准备

1.离心管

2.吸头

3.一次性手套

4.黑色96孔板

使用注意事项

1.螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体收集至管底，避免开盖时液体洒落。

2.荧光探针标记后，一定要洗净残余的未进入细胞内的探针，否则会导致背景较高。

3.探针标记完毕并洗净残余探针后，可以进行激发波长的扫描和发射波长的扫描，以确认探针的标记情况是否正常。

4.尽量缩短探针标记后到测定所用的时间，以减少各种可能的误差。

5.O11在光照和空气中易被氧化，注意避光密封保存。

6.对不同的细菌样本，应选择合适的孵育时间和浓度，以观察ROS的变化。应根据预实验情况调整染色浓度和时间。

使用方法

O11探针工作液配制：

1. 根据样本数量，用纯水将探针稀释液B进行10倍稀释。

2. 根据样本数量，用10倍稀释过的探针稀释液B将探针进行1000倍稀释。即配成染色工作液。

O11探针标记：

1. 准备1 ml新鲜待测菌液。

2. 将待测细菌样本离心收集菌体。

3. 用PBS洗涤菌体2-3次。离心收集菌体沉淀。

4. 用500 μl-1ml染色工作液重悬菌体。

5. 在37℃避光孵育30-45分钟。

6. 孵育结束后，离心收集菌体。

7. 用PBS清洗细胞一次。离心收集菌体。

8. 用500 μl PBS重悬菌体。充分混匀。

9. 取200 μl加入荧光检测用黑色96孔板。

10. 置于酶标仪中，后于激发波长为488 nm、发射波长526 nm检测荧光强度。

结果处理：

荧光强度强，细菌活性氧强度高。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！