过氧化氢（H2O2）检测试剂盒（定量，分光光度计）

产品概述

过氧化氢H2O2检测试剂盒检测原理是H2O2与显色剂反应生成黄色的过氧化物-显色剂复合物，该黄色复合物在412nm处有光吸收，其黄色深浅与过氧化氢浓度在一定范围内呈线性关系，通过分光光度计检测412nm处吸光度，即可换算样品中过氧化氢浓度。 该试剂盒可以用于检测血清、血浆、细胞、组织等样品中过氧化氢(H2O2)含量。 过氧化氢(H2O2)是生物体内最常见的活性氧分子，主要由SOD和XOD等催化产生，由CAT和POD等催化降解。H2O2不仅是重要的活性氧之一，也是活性氧相互转化的枢纽。生命体内积累的H2O2是由一些氧化物催化超氧阴离子发生氧化还原反应而形成，H2O2相对超氧阴离子性质稳定，但其存在可以直接或间接导致细胞膜脂质过氧化损害，加速细胞的衰老和解体，H2O2也是许多氧化应急反应中的关键调节因子。 可以提供细胞凋亡、增殖、毒性、活性氧、细胞代谢、氧化应激、细胞膜流动性、膜通透性转换孔、细胞耗氧率、细胞内pH、细胞粘附、细胞自噬等数百种检测试剂盒产品。 可以为您提供各种颜色的M系列、N系列、L系列、E系列、G系列等细胞膜、细胞质、细胞核、溶酶体、线粒体、内质网、高尔基体、骨架、微管等细胞、细胞亚结构荧光染色试剂盒产品，以及钙离子、钠离子、氩离子等各种荧光染色试剂盒产品。 可以提供动物、植物、微生物、酵母、水产、家禽、兽类、土壤等样本的各种生化指标检测的数百种试剂盒产品。

保存温度

2-8℃保存

注意事项

开盖后组份按要求条件保存。

有效期

6个月

检测方法

分光光度计

适用样本

血清、血浆、细胞、组织等

仪器准备

1. 分光光度计（412nm）

2. 低温离心机

3. 匀浆机/匀浆器

4. 移液器

5. 冰箱

6. 冰盒

试剂准备

1. 纯水

2. 丙酮

3. 蛋白定量试剂盒

耗材准备

1. 离心管

2. 吸头

3. 一次性手套

使用注意事项

1.H2O2标准和反应液应严格密闭保存，避免挥发，否则效率会下降。

2.过氧化物-显色剂复合物黄色沉淀溶解于溶解液时需要一段时间，需完全溶解，否则有可能影响比色结果。

3.本试剂盒亦可用酶标仪进行检测，但检测的样本数相应增加。

4.加入碱性基液、硫酸钛溶液时，应直接加入至溶液中，不要粘到管壁。

5.H2O2标准品A和溶解液D有一定腐蚀性，请小心操作。

6.显色剂C溶解于水后应尽早使用，如暂时不用，可短期放置4℃冰箱保存。亦可用分析天平称取一定量的粉剂，配置5%的浓度即可。

使用方法

样品处理：

A. 血清（浆）中H2O2含量测定

直接取原液检测

B. 组织中H2O2含量测定

准确称取组织重量，按重量(g):体积（ml）=1:9的比例，加入9倍体积的生理盐水，1g组织加入9ml生理盐水，冰水浴条件下机械匀浆，1000转/分，离心10分钟，取上清匀浆待测。

H2O2 标准品工作液的配制 ：

由于过氧化氢不是非常稳定，使用前需自行测定过氧化氢的实际浓度。

本试剂盒提供的H2O2基液的H2O2浓度约为1M，用纯水稀释100倍，使H2O2浓度约为10mM。纯水调零，分光光度计测定A240，根据公式H2O2浓度(mM)=22.94×A240计算出H2O2基液中H2O2的实际浓度，再用丙酮稀释H2O2基液配制10mM H2O2-丙酮标准溶液。

(一般情况下，新配制的10mM H2O2基液A240为0.4~0.45，3个月以后A240为0.35~0.42)

按下表依次稀释（常用浓度0.3~3Mm,即1~5号）：

配制显色溶液：

将0.3g显色剂试剂C小心缓慢的加入至6ml纯水中，即为5%显色剂溶液，4℃避光保存。

测定：

1. 按下表H2O2加样：按照下表设置空白管、标准管、测定管，溶液应按照顺序依次加入，并注意避免产生气泡。如果样品中的H2O2浓度过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定，样品的检测最hao能设置平行管。

【注】：

加入试剂B、显色剂溶液时，应直接加至溶液中，不要粘到管壁。

2. 充分混匀，室温放置5min。

3. 在4℃ 12000g离心15min，弃上清液，留沉淀。（如有必要可加入预冷丙酮反复洗涤沉淀物）

【注】：

? 空白管无需该步骤。

4. 向标准管、测定管的沉淀中加入2ml溶解液D，摇动，使沉淀完全溶解。

【注】：

? 空白管无需该步骤。

5. 比色杯光径1cm，以空白调零，以分光光度计测定412nm处系列标准管、测定管的吸光度。

【注】：

如果没有分光光度计，亦可用酶标仪检测，但如果有条件，尽量采用分光光度计测定。

计算：

以系列丙酮- H2O2溶液(0.3、0.5、0.8、1、3、5、8mM)为横坐标，以对应的吸光度为纵坐标，绘制标准曲线，求得回归方程。以测定管吸光度代入回归方程求得待测样品中H2O2含量。

血清（浆）中H2O2含量：

H2O2 (mmol/L)=C0×N

组织中H2O2含量：

H2O2 (mmol/g)=(C0×VT×N)/m

式中：

C0=根据待测样品的吸光度在标准曲线求得H2O2浓度(mM)

VT=待测样品的总体积(L)

m=样品质量(g)

N=样本稀释倍数

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！