MTT细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒

产品概述

MTT法细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒被广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的检测。活细胞的线粒体中存在与NADP相关的脱氢酶，可将黄色的MTT还原生成结晶状的蓝紫色的Formazan，死细胞无此酶，MTT不被还原。在特定溶剂存在的情况下，Formazan可以被完全溶解。然后通过酶标仪可以测定460-630nm波长附近的吸光度。细胞增殖越多越快，则吸光度越高；细胞毒性越大，则吸光度越低。 本试剂盒灵敏度高，线性范围宽，使用方便。 可以提供细胞凋亡、增殖、毒性、活性氧、细胞代谢、氧化应激、细胞膜流动性、膜通透性转换孔、细胞耗氧率、细胞内pH、细胞粘附、细胞自噬等数百种检测试剂盒产品。 可以为您提供各种颜色的M系列、N系列、L系列、E系列、G系列等细胞膜、细胞质、细胞核、溶酶体、线粒体、内质网、高尔基体、骨架、微管等细胞、细胞亚结构荧光染色试剂盒产品，以及钙离子、钠离子、氩离子等各种荧光染色试剂盒产品。

保存温度

2-8℃避光

注意事项

1.染色液2-8℃避光保存；

2.需要长期保存可以分装后-20℃保存，避免反复冻融。

3.溶解液室温保存。

有效期

一年

检测方法

酶标仪

适用样本

动物细胞

产品应用

酶标仪

仪器准备

1.带有450nm滤光片的酶标仪 2. CO2培养箱

试剂准备

1.PBS 2.纯水

耗材准备

1.移液器及吸头 2.96孔培养板

使用注意事项

1.需长时间保存可-20℃避光保存。避免反复冻融，否则将会增加空白吸收，从而影响检测结果。最hao小剂量分装，用避光袋或是黑纸、锡箔纸包住避光。

2.还原的MTT在460-630均有较好的吸收，如果你的酶标仪是滤光片，可以选470 nm左右或630 nm左右的滤光片，如果酶标仪有单波长，你可以在检测前扫描一下吸收谱，选用最da吸收波长检测，最da波长，在550nm附近，必要时加一个参比波长以扣除非特异性吸收。

3.MTT溶液为黄色，需避光保存，长时间光照会导致失效。当颜色变为灰绿色时，请勿使用。

4.Formazan溶解液结冻或产生沉淀时可以37℃水浴孵育以促进溶解，并且必须在全部溶解并混匀后使用。

5.细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。

使用方法

贴壁细胞：

1. 收集对数期细胞，每孔加入100ul细胞悬液,使待测细胞调密度约2000-10000孔。

2. 5%CO2，37℃孵育，至细胞单层铺满孔底（96孔平底板）,加入浓度梯度的药物,原则上，细胞贴壁后即可加药，也可两小时，或半天时间后加药，一般5-7个梯度,每孔100ul,设3-5个复孔。

3. 5%CO2，37℃孵育16-48小时，倒置显微镜下观察。

4. 每孔加入10ulMTT溶液，继续培养4h。若药物与MTT能够反应，可先离心后弃去培养液，小心用PBS冲2-3遍后，再加入含MTT的培养液。

5. 终止培养，小心吸去孔内培养液。

6. 每孔加入150ul溶解液，置摇床上低速振荡10min，使结晶物充分溶解。在酶标仪490nm或550nm或570nm处测量各孔的吸光值。

7. 同时设置调零孔（培养基、MTT、溶解液），对照孔（细胞、相同浓度的药物溶解介质、培养液、MTT、溶解液） 悬浮细胞：

1. 收集对数期细胞，调节细胞悬液浓度1×106/ml，按次序将补足的无血清培养基40ul、需检测药物10ul、细胞悬液50ul（即5×104细胞/孔），共100ul加入到96孔板（边缘孔用无菌水或PBS填充）。每板设对照（加100?l培养基）。

2. 置37℃，5%CO2孵育16-48小时，倒置显微镜下观察。

3. 每孔加入10 ul MTT溶液，继续培养4 h。

4. 离心（1000转x10min），小心吸掉上清，每孔加入100 ul溶解液，置摇床上低速振荡10 min，使结晶物充分溶解。490nm或550nm或570nm处测量各孔的吸光值。

5. 同时设置调零孔（培养基、MTT、溶解液），对照孔（细胞、相同浓度的药物溶解介质、培养液、MTT、溶解液），每组设定3-5复孔。 结果分析 ：

细胞的存活率：将各测试孔的OD值减去调零孔OD值或对照孔OD值。各重复孔的OD值取均数±SD。

细胞的存活率以T/C%表示，T为加药细胞的OD值，C为对照细胞的OD值。

细胞存活率% =（加药细胞OD/对照细胞OD）×100

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！