XTT细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒

产品概述

XTT细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒是应用二甲氧唑黄2,3-bis[2-methoxy-4-nitro-5-sulfophenyl]-5-[(phenylamino)carbonyl]-2H-tetrazolium hydroxide快速高灵敏度检测细胞增殖和细胞毒性的比色检测产品。 XTT在电子耦合试剂存在的情况下能够被线粒体内的一些与辅酶Ⅱ相关的脱氢酶还原成橙黄色的水溶性的Formazan，生成的Formazan量与活细胞数量成正比。细胞增殖越多越快，则颜色越深；细胞毒性越大，则颜色越浅。对于同样的细胞，颜色的深浅和细胞数量呈线性关系。 本XTT试剂为配制好的即用型试剂，直接加入到细胞样品中，不需要预配各种成分，XTT试剂很稳定，对细胞没有毒性，可以长时间孵育细胞。XTT法测定细胞增殖或毒性试验中活细胞数目的灵敏度高，无放射性，检测细胞增殖实验的灵敏度比其它方法如MTT高。 可以提供细胞凋亡、增殖、毒性、活性氧、细胞代谢、氧化应激、细胞膜流动性、膜通透性转换孔、细胞耗氧率、细胞内pH、细胞粘附、细胞自噬等数百种检测试剂盒产品。

保存温度

2-8℃避光

注意事项

1.需要长期保存可以分装后-20℃保存.

2.避免反复冻融。

3.冻存后融解时注意重新充分混匀。

4.试剂拆封后请尽快使用完！

有效期

一年

检测方法

酶标仪

适用样本

动物细胞

产品特点

1.使用方便：仅使用单一试剂；

2.灵敏度高，数据可靠，重现性好，线性范围更宽；

3.结果稳定：试剂本身稳定性高，实验结果稳定可靠；

4.无需放射性同位素和有机溶剂，对细胞毒性低；

5.适合于高通量药物筛选。

产品应用

酶标仪

仪器准备

1.带有450nm滤光片的酶标仪 2. CO2培养箱

试剂准备

1.PBS 2.纯水

耗材准备

1.移液器及吸头 2.96孔培养板

使用注意事项

1.旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。

2.需长时间保存可-20℃避光保存。避免反复冻融，否则将会增加空白吸收，从而影响检测结果。最hao小剂量分装，用避光袋或是黑纸、锡箔纸包住避光。

3.正式实验前，建议先做几个孔摸索接种细胞的数量和加入XTT试剂后的培养时间。在1000-100000之间摸细胞数量。

4.部分药物可能对检测有影响，有影响时需换液后检测，无影响时直接检测。用培养基或PBS来配制待检测药物，加入XTT试剂，测药物溶液在450 nm处的吸光度。如果该吸光度与不含药物仅加XTT试剂的培养基或PBS吸光度差异不大，则可以直接加入XTT，如果吸光度相对较大，则需要除去培养基，并用新鲜培养基洗涤细胞两次，然后加入新的100 μl培养基和10 μl XTT进行检测。

5.如果样品为高浑浊度的细胞悬液，或者为了去除其它颜色物质的影响，建议设定600 nm (或600 nm以上) 作为参比波长，以OD450扣除参比波长的O.D值即可。

6.接种时注意细胞悬液一定要混匀，以避免细胞沉淀下来，导致每孔中的细胞数量不等，可以每接种几个孔就混匀一下。培养板周围一圈孔培养基容易挥发，为了减少误差，建议培养板的四边每孔只加培养基，而不作为指标检测孔。

使用方法

细胞活性、细胞增殖-毒性检测

1. 收集细胞，加细胞悬液100 μl（约5000-10000个细胞）到96孔板（边缘孔用无菌水或PBS填充）。每板设对照（加100?l培养基）。

2. 置37℃，5% CO2孵育过夜，倒置显微镜下观察。

3. 每孔加入10 μl 待检测药物溶液， 37℃孵育。

4. 每孔加入10 μl XTT试剂，37℃孵育1-4 小时。

5. 测定450 nm各孔的吸光值，如无450nm滤光片，可以使用450-490nm的滤光片。同时设置空白孔（培养基和XTT试剂，无细胞），对照孔（不加药培养基和XTT试剂，有细胞），每组设定3-5复孔。

细胞活力计算：

将各测试孔的OD值减去调零孔OD值或对照孔OD值。各重复孔的OD值取平均数。

细胞活力% =（加药细胞OD-空白OD/对照细胞OD-空白OD）×100

细胞数量测定

1. 先用细胞计数板计数所制备的细胞悬液中的细胞数量，然后接种细胞。

2. 按比例 (例如：1/2比例) 依次用培养基等比稀释成一个细胞浓度梯度，一般要做3-5个细胞浓度梯度，每组3-6个复孔。

3. 接种后培养2-4小时使细胞贴壁，然后加XTT试剂培养一定时间后测定O.D值，制作出一条以细胞数量为横坐标 (X轴)，O.D值为纵坐标 (Y轴) 的标准曲线。根据此标准曲线可以测定出未知样品的细胞数量 (使用此标准曲线的前提条件是实验的条件要一致，便于确定细胞的接种数量以及加入XTT试剂后的培养时间)。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！