CFSE/PI双染细胞毒性检测试剂盒

产品概述

CFSE/PI双染细胞毒性检测试剂盒是利用细胞荧光染料CFSE(CFDA-SE)和PI对细胞进行染色，利用CFSE标记靶细胞，PI标记死的靶细胞来区分不同的细胞，活的靶细胞成绿色，死的靶细胞成红色和绿色，从而检测细胞毒性作用。 根据不同的实验方案设计，可以用来检测化合物的细胞毒性作用。也可以用来检测杀伤性T细胞或NK细胞介导的细胞毒作用。 CFDA-SE是一种可对活细胞进行荧光标记的新型染料，可以标记活体细胞。CFDASE是一种带有琥珀酰亚胺(NHS)的荧光染料，可以结合细胞内的蛋白质。CFDASE在结构上将酚羟基部位改造成AM体，所以自身不发荧光，荧光背景低，脂溶性高，能够轻易穿透细胞膜，进入细胞内的CFDASE的AM部位能被细胞内酯酶水解生成CFSE，通过共价结合赖氨酸侧链的氨基而掺入细胞内和细胞表面的蛋白，且结合后发出强的绿色荧光。CFSE的琥珀酰亚胺(NHS)和细胞内蛋白质的氨基部位结合，固定在细胞内，不会漏出细胞外。CFSE进入细胞后定位于细胞膜、细胞质和细胞核，在细胞核的荧光最强。 CFSE毒性小，不影响细胞的增殖能力。此方法操作简单，且不用放射性同位素，不存在安全隐患。可以更快速，更准确和更安全地得到想要的实验数据。 CFSE/PI标记细胞后通常用流式细胞仪进行细胞毒性检测。 CFSE标记细胞呈绿色荧光，荧光波长：λex=496 nm, λem=516 nm。流式检测时的激发波长可以选择488nm，此时的发射波长为516nm，使用流式细胞仪检测时可以采用FL1 detection channel。PI标记细胞呈红色荧光，流式检测时的激发波长可以选择488nm，此时的发射波长为647nm，使用流式细胞仪检测时可以采用FL2 detection channel。 CFSE标记的细胞除了流式细胞仪检测细胞毒性外，还可单染后用于细胞增殖检测，或者用荧光酶标板定量活细胞数目，或者用荧光显微镜进行均一染色的细胞示踪观察。 可以提供各种细胞检测试剂盒。包括细胞凋亡、活性、增殖、毒性、活性氧、周期、细胞代谢、氧化应激、膜流动性、膜电位、膜通透性转换孔、细胞耗氧率、胞外酸化、细胞内pH、细胞粘附、细胞自噬等数百种细胞检测试剂盒产品。

保存温度

2-8℃避光

注意事项

1.长期不用可以-20℃保存。

2.CFSE染色液避免反复冻融。

3.CFSE染色液需要长期保存时可以根据使用情况进行小量分装后-20℃保存。

4.试剂拆封后请尽快使用完！

有效期

一年

检测方法

1.流式细胞仪

2.荧光显微镜

3.激光共聚焦

适用样本

动物细胞

产品应用

1.流式细胞仪

2.荧光显微镜

3.激光共聚焦

仪器准备

1.带有450nm滤光片的酶标仪 2. CO2培养箱

试剂准备

1.PBS 2.纯水

耗材准备

1.移液器及吸头 2.96孔培养板

使用注意事项

1.旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。

2.染色浓度根据细胞种类的不同和每孔内细胞数量的多少而异。

3.CFSE母液极易水解，建议分装保存，分装后用封口膜密封管口，再用锡箔纸包裹，zui后和干燥剂一起用塑料袋密封，≦-20℃冷冻保存。

4.冬天气温较低时CFSE溶解液会凝固，可先在37℃水浴至溶解液完全融解后再进行配制，配制过程中注意避免溶液凝固，保持温度至CFSE溶解完全。

5.CFSE工作液应现配现用，不能提前配制，因为CFSE吸水会分解，影响染色效果。

6.CFSE易被水解，在水溶液中会很快变质。母液请在使用过程中避免接触水。工作液在标记细胞的过程中和水接触是在许可的时间范围内的。

7.CFSE标记细胞仅需5-15分钟即可完成。对于不同细胞，最jia标记时间需自行摸索。正式实验前，建议先做几个孔摸索染色浓度和加入CFSE试剂后的培养时间。

8.荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。

9.以下实验步骤仅供参考，请根据实际的实验方案设计或参考相关文献为准。

10.必须设置全阴，CFSE单标，PI单标的靶细胞的参照以设置流式。

使用方法

细胞CFSE染色：

1. 根据需要检测的细胞样品数，用HBSS将CFSE母液200-4000倍稀释，配制成CFSE染色工作液。不同的细胞需要根据预实验结果确定最jia染色浓度。如果荧光强度弱，可以适当提高CFSE的终浓度。如果背景太高，可以适当降低CFSE的终浓度，请摸索条件找到最jia浓度。

2. 将培养好的待测靶细胞消化后收集，用PBS洗涤2次。

3. 将待测细胞用染色工作液重悬，至细胞浓度大约107/ml。

4. 在37℃培养箱中避光孵育15-30分钟。

5. 加10倍体积的含血清培养基，400×g离心5分钟。

6. 离心后去上清，收集细胞，用HBSS或无血清培养基洗涤细胞1-2次，zui后加入培养基重悬细胞。

7. 在37℃培养箱中孵育20-30分钟。

细胞模型制备：

1. 收集待检测的靶细胞。

2. 进行相应的毒性药物处理或者效应细胞处理。

细胞检测：

1. 收集制备好的毒性处理过的细胞模型。

2. 用500 μl HBSS重悬细胞，加入10 μl PI染色液，混匀。

3. 在2-8℃避光孵育5-15分钟。

4. 在400×g离心5分钟收集细胞。

5. 用500 μl HBSS或PBS重悬细胞。

6. 取500 μl细胞悬液，用流式细胞仪或荧光显微镜检测。

7. 根据流式结果计算死亡细胞百分率。被杀伤死亡的靶细胞被PI染上会出现在CFSE+PI+区域，未杀伤的在CFSE+PI-区域，得出被杀伤的靶细胞的比例。用这个比例再计算毒性。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！