细胞周期检测试剂盒(7-AAD)

产品概述

细胞周期检测试剂盒是利用细胞内DNA能够和荧光染料结合的特性，细胞各个时期其DNA含量不同从而结合的荧光染料不同，流式细胞仪检测的荧光强度也不一样来检测细胞周期。 细胞周期（cell cycle)是指细胞从前一次分裂结束起到下一次分裂结束为止的活动过程，通常由G0/G1期、S期、G2期和M期组成。G1期：细胞开始RNA和蛋白质的合成，但DNA含量仍保持二倍体。S期：DNA开始合成，这时细胞核内DNA的含量介于G1期和G2期之间。当DNA复制结束成为4倍体时，细胞进入G2期。G2期的细胞继续合成RNA及蛋白质，直到进入M期。因此，单纯从DNA含量无法区分G2期和M期。一旦有丝分裂发生，细胞分裂成两个细胞，这两个细胞或者进入下一个细胞周期，或者进入静止期（G0期），而G0期从DNA含量上同样无法与G1期区分。因此，整个复制周期可以描述为G0/G1、S、G2/M期。通过核酸染料PI标记DNA,并由流式细胞仪进行分析，可以得到细胞各个时期的分布状态，计算出G0/G1%、S%、G2/M%，了解增殖能力，在肿瘤病理学研究中，通常以S期细胞比率作为判断肿瘤增殖状态的指标。 7AAD为插入性核酸荧光染料，能选择性的嵌入核酸DNA双链螺旋的碱基之间与之结合，其结合的量与DNA的含量成正比例关系，用流式细胞仪进行分析，就可以得到细胞周期各个阶段的DNA分布状态，从而计算出各个期的百分含量。7-AAD染色后，假设G0/G1期细胞的荧光强度为1，那么含有双份基因组DNA的G2/M期细胞的荧光强度的理论值为2，正在进行DNA复制的S期细胞的荧光强度为1-2之间。 一般细胞周期检测试剂盒采用PI染色，但是由于PI的发射波长是<625nm,通常在FL2中检测,对FITC、PE的干扰大。PI由于波谱较宽，同时在FL2\FL3中也能测，所以用了PI最多再加一个FITC，FL3就没法用了。PI还有一个重要的缺点是不容易清洗干净,使用后清洗流式细胞仪更加费时费物。 7-AAD细胞周期试剂盒有效的解决了这些弊端，7-AAD的发射波长是650nm,只占用FL3通道进行检测，FITC、PE两个通道受影响都小，可以做三色分析。

保存温度

-20℃避光

注意事项

1.染料短期2周内可以2-8℃保存。染料长期不用可以-20℃保存。避免反复冻融。

2.染色液A为DMSO溶液，冬季气温较低时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热融解，变成液体状态后离心至管底部再开盖。

3.可以用手捂住使其融解或37℃短时间水浴。吸头也需要放在培养箱预热，否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。

4.试剂拆封后请尽快使用完！

有效期

6个月

检测方法

流式细胞仪

适用样本

1.悬浮细胞 2.贴壁细胞

产品应用

流式细胞仪

仪器准备

1.流式细胞仪

2.离心机

3.移液器

4.冰箱

5.冰盒

试剂准备

1.PBS 缓冲液（pH7.4，实验室常用的10mM磷酸缓冲盐溶液（1X））

2.或者HBSS（Hank's Balanced Salt Solution）

耗材准备

1.离心管

2.吸头

3.一次性手套

使用注意事项

1.细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。

2.最hao使用含EDTA的细胞消化液。

3.洗涤细胞离心转速不可超过800×g。

4.乙醇固定时离心大概采用2000×g力5分钟，离心力太小可能部分细胞难以沉淀。? 5.固定时在振荡器上轻轻振荡细胞，并缓慢滴加75%乙醇，直接加入会导致细胞团聚的现象，很难重悬成单细胞。或者先用冷PBS悬浮细胞，充分悬浮，使细胞充分分散成单细胞。之后缓慢加入无水乙醇，终浓度为70-90%乙醇。乙醇固定之后须无细胞沉淀。

使用方法

1. 收集样本细胞，细胞数量在5-10X106个。

2. 用冷PBS洗涤细胞两次。

3. 在15ml离心管中，用500ul PBS重悬细胞。

4. 滴加2-5ml冷乙醇4℃固定过夜或-20℃固定1小时。

5. 取5X106细胞，在15ml锥形离心管中1000×g离心10分钟，弃上清，收集细胞。

6. 用冷PBS洗涤细胞两次。

7. 用500ul冷PBS重悬细胞。

8. 加入Rnase A溶液20ul， 37℃水浴30分钟。

9. 用400目细胞筛网过滤。

10. 在1000×g离心10分钟，弃上清，收集细胞。

11. 用500ul PBS重悬细胞。

12. 加入5ul 7-AAD染液，充分混匀， 4℃避光孵育30分钟-1小时。

13. 流式检测结果。激发波长为488nm。发射波长647nm。采用适当分析软件进行细胞DNA含量分析和光散射分析。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！