AO/PI双染试剂盒

产品概述

AO/PI双染细胞凋亡检测试剂盒是采用AO/PI探针双染细胞核的方法检测凋亡细胞的状态，是细胞凋亡形态学研究常用的染色方法。 吖啶橙（Acridine Orange，AO）为一种具有细胞膜通透性的荧光染料，该染料能透过活细胞膜，使核DNA和RNA染色。它与细胞中DNA和RNA结合量存在差别，复合物可发出不同颜色的荧光，AO与dsDNA结合时发出绿色荧光，而与ssDNA和RNA结合时发出红色荧光。当与DNA结合时，它与荧光素在光谱上非常相似，激发最大值为502nm，发射最大值为525nm（绿色）。当它与RNA结合时，激发最大值移至460nm（蓝色），发射最大值移至650nm（红色）。 在荧光显微镜下观察，吖啶橙可透过正常细胞膜，使细胞核呈绿色或黄绿色均匀荧光；而在凋亡细胞中，因染色质固缩或断裂为大小不等的片断，形成凋亡小体。吖啶橙使其染上致密浓染的黄绿色荧光，或黄绿色碎片颗粒；而坏死细胞黄荧光减弱甚至消失。 Propidium Iodide是一种DNA结合性染料，其激发和发射波长分别为488nm和630nm，产生红色荧光，但无膜通透性，不能透过活细胞膜，只能染死细胞。因此，在荧光显微镜下观察，正常细胞不能着色，早期凋亡细胞呈微弱红光，晚期凋亡细胞红光加强，坏死细胞呈强红色荧光。

保存温度

2-8℃避光

注意事项

1.开盖前请离心。

2.开盖后组份按要求条件保存。

3.拆封后请尽快使用完！

有效期

6个月

检测方法

1.流式细胞仪

2.激光共聚焦

3.荧光显微镜

适用样本

1.悬浮细胞

2.贴壁细胞

产品应用

1.流式细胞仪

2.激光共聚焦

3.荧光显微镜

试剂准备

1.PBS 缓冲液（pH7.4，实验室常用的10mM磷酸缓冲盐溶液（1X））

2.或者HBSS（Hank's Balanced Salt Solution）

耗材准备

1.离心管

2.吸头

3.一次性手套

使用注意事项

1.螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体收集至管底，避免开盖时液体洒落。

2.细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。

3.本染色试剂盒可用于细胞、细胞涂片等。以下以悬浮培养细胞的荧光显微镜检测为例，其他方法请参阅相关资料。

4.贴壁细胞可以消化下来染色，也可以直接原位染色。

使用方法

染色工作液配制：

1. 根据样品数，按下列比例配制染色缓冲液。 取100μL试剂C用900μL纯水稀释，充分混匀即成染色缓冲液。

2. 每500μL 染色缓冲液加入5ul AO染色液和10ul PI染色液，充分混匀，即成染色工作液。

悬浮细胞染色

1. 收集样本细胞，细胞数量在10X10⁵个以内。

2. 用PBS洗涤细胞两次。

3. 用500μL 染色工作液将细胞重悬。

4. 轻轻混匀后4℃避光孵育10-20分钟。

5. 用PBS洗涤细胞。

6. 用荧光显微镜或流式细胞仪检测结果。

贴壁细胞原位染色;

1. 用PBS洗涤细胞2次。

2. 细胞培养板中或细胞爬片上加入适量体积的染色工作液。

3. 37 ℃孵育细胞 10～20分钟，不同的细胞最佳培养时间不同。可以用20分钟作为起始孵育时间，之后优化体系以得到均一的标记结果。

4. 吸干染色工作液，用培养基洗培养板或盖玻片2～3次，每次用预热的培养基覆盖所有细胞，然后吸干培养基。

结果分析 ：

在荧光显微镜下，选用488nm激发光镜检：

AO染色正常细胞DNA呈均匀黄色或黄绿色，形态结构正常。

当细胞凋亡时，染色质浓缩，细胞核碎裂成点状，被染成大小不一、致密浓染。

坏死细胞呈强红色荧光。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！