Propidium Iodide染色试剂盒

产品概述

PI染色试剂盒可用于细胞凋亡检测，也可用于普通的细胞核染色以及某些特定情况下的双链DNA染色，染色后可用荧光显微镜检测或流式细胞仪检测。 Propidium Iodide是一种DNA结合性染料，其激发和发射波长分别为488nm和630nm，产生红色荧光，但无膜通透性，不能透过活细胞膜，只能染死细胞。因此，在荧光显微镜下观察，正常细胞不能着色，早期凋亡细胞呈微弱红光，晚期凋亡细胞红光加强，坏死细胞呈强红色荧光。也可采用流式细胞仪利用细胞形态上的改变影响它们的光散射特性改变进行分析，还可与RNase A结合进行细胞周期分析。 可以提供各种细胞检测试剂盒。包括细胞凋亡、增殖、毒性、活性氧、细胞代谢、氧化应激、细胞膜流动性、膜通透性转换孔、细胞耗氧率、细胞内pH、细胞粘附、细胞自噬等数百种检测试剂盒产品。

保存温度

2-8℃避光

注意事项

1.长期不用可以-20℃保存。

2.染色液避免反复冻融。多次冻融会导致失效。

3.染色液需要长期保存时可以根据使用情况进行小量分装后-20℃保存。

4.试剂拆封后请尽快使用完！

有效期

1年

检测方法

1.流式细胞仪

2.激光共聚焦

3.荧光显微镜

适用样本

1.悬浮细胞

2.贴壁细胞

产品应用

1.流式细胞仪

2.激光共聚焦

3.荧光显微镜

试剂准备

1.PBS 缓冲液（pH7.4，实验室常用的10mM磷酸缓冲盐溶液（1X））

2.或者HBSS（Hank's Balanced Salt Solution）

耗材准备

1.离心管

2.吸头

3.一次性手套

使用注意事项

1.螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体收集至管底，避免开盖时液体洒落。

2.细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。

3.染色后立即进行分析。

4.染色时间根据不同样本的实际染色结果做相应调整。

5.流式检测细胞凋亡时，其DNA可染性降低被认为是凋亡细胞的标志之一，但这种DNA可染性降低也可能是因为DNA含量的降低，或者是因为DNA结构的改变使其与染料结合的能力发生改变所致。在分析结果时应该注意。

6.本染色液可用于石蜡切片、冰冻切片、细胞涂片、细胞的检测。石蜡切片用常规方法脱蜡、分化、冰冻切片用冰丙酮固定后检测。

使用方法

本染色试剂盒用于细胞染色分析，也可用于细胞涂片、石蜡切片、冰冻切片的检测。石蜡切片用常规方法脱蜡、分化、冰冻切片用冰丙酮固定后检测。以下以培养细胞的荧光显微镜检测为例，细胞染色可用预冷的70%的乙醇固定，4℃，1—2小时，也可不固定，其他方法请参阅相关资料。

染色缓冲液的配制：

根据样品数按下列比例配制染色缓冲液。 取100μL试剂B加900μL无菌纯水稀释，混匀即成染色缓冲液。

荧光显微镜观察

1. 收集细胞，PBS洗涤细胞一次，1000×g离心5分钟，用染色缓冲液重悬细胞，调整细胞浓度约为106个/ml；

2. 取100ul细胞悬液，加入2-5ul PI染液，轻轻混匀；

3. 4℃避光放置5 min后，滴加于载玻片上，加盖玻片；

4. 荧光显微镜检测。

流式检测：

1. 收集细胞，PBS洗涤细胞一次，1000×g离心5分钟，用染色缓冲液重悬细胞，调整细胞浓度约为106个/ml；

2. 500ul细胞悬液中加入5-10ul PI染液；

3. 在4℃避光放置15-30 min；

4. 流式细胞仪检测。

结果分析 ：

置于荧光显微镜下用488nm激发光观察结果：正常细胞不能着色，早期凋亡细胞呈微弱红光，晚期凋亡细胞红光加强，坏死细胞呈强红色荧光。

流式检测用氩离子激发荧光，激光光波波长为488nm，发射光波波长大于630nm，产生红色荧光分析PI荧光强度的直方图也可分析前散射光对侧散射光的散点图。在前散射光对侧散射光的散点图或地形图上，凋亡细胞与正常细胞相比，前散射光降低，而侧散射光可高可低，与细胞的类型有关；

在分析PI荧光的直方图时，先用门技术排除成双或聚集的细胞以及发微弱荧光的细胞碎片，在PI荧光的直方图上，凋亡细胞在G1/G0期前出现一亚二倍体峰。如以G1/G0期所在位置的荧光强度为1.0，则一个典型的凋亡细胞样本其亚二倍体峰的荧光强度为0.45，可用鸡和鲑鱼的红细胞的PI荧光强度做参照标准，两者分别为0.35和0.7，可以确保在两者之间的不是细胞碎片而是完整的细胞。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！