活细胞/死细胞双染试剂盒

产品概述

活细胞/死细胞染色试剂盒是采用Calcein-AM/EthD-I双染细胞的方法染色活细胞和死细胞。 Calcein-AM是一种可对活细胞进行荧光标记的细胞染色试剂，Calcein-AM由于在Calcein的基础上加强了疏水性，因此能够轻易穿透活细胞膜。当其进入到细胞质后，酯酶会将其水解为Calcein留在细胞内，发出强绿色荧光。与其它同类试剂（如BCECF-AM和Carboxy-fluorescein diacetate）相比，Calcein-AM是最适合作为荧光探针去染活细胞的，因为它的细胞毒性很低。Calcein的激发和发射波长分别为490 nm和515 nm。Calcein -AM仅对活细胞染色。 作为核染色染料的EthD-I （Ethidium Homodimer 1）不能穿过活细胞的细胞膜，它穿过死细胞膜的无序区域而到达细胞核，并嵌入细胞的DNA双螺旋从而产生红色荧光(激发：488nm，528nm，发射：617 nm)，因此EthD-I仅对死细胞染色。 由于Calcein-DNA和EthD-I-DNA都可被490 nm激发，因此可用荧光显微镜同时观察活细胞和死细胞。用545 nm激发，仅可观察到死细胞。根据以上特点，Calcein, AM和EthD-I经常被结合用来作为活细胞和死细胞的双重染色。

保存温度

-20℃避光

注意事项

1.长期不用可以-20℃保存。

2.染色液Calcein AM注意防潮；避免反复冻融。

3.染色液A为DMSO溶液，冬季气温较低时在室温时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热溶解，吸头也需要放在培养箱预热，否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。融解后离心至管底部再打开螺旋盖。

4.注意需要加热融解，变成液体状态后离心至管底部再开盖。可以用手捂住使其融解或37℃短时间水浴。

5.试剂B溶解后需要用吸头吹打混匀。

6.试剂拆封后请尽快使用完！

有效期

1年

检测方法

1.流式细胞仪

2.激光共聚焦

3.荧光显微镜

适用样本

1.悬浮细胞

2.贴壁细胞

产品应用

1.流式细胞仪

2.激光共聚焦

3.荧光显微镜

试剂准备

1.PBS 缓冲液（pH7.4，实验室常用的10mM磷酸缓冲盐溶液（1X））

2.或者HBSS（Hank's Balanced Salt Solution）

耗材准备

1.离心管

2.吸头

3.一次性手套

使用注意事项

1.螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体收集至管底，避免开盖时液体洒落。

2.细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。

3.试剂A为DMSO溶液，冬季气温较低时在室温时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热溶解，吸头也需要放在培养箱预热，否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。融解后离心至管底部再打开螺旋盖。

4.试剂A为了便于观察防止误操作导致损失，在试剂盒中时是采用透明管包装，收到后可以离心移入干燥黑色避光密封管或者用铝箔包裹避光。

5.由于Calcein-AM的稳定性比较差，染色工作液必须现配现用，并且在当天用完。

使用方法

1. 染色工作液的配制：

根据样品数按下列比例配制染色工作液。

用染料稀释液试剂C将染色液A和B分别10倍稀释。

每10ml HBSS缓冲液或无血清培养基中加入100μl稀释过的染色液A，充分混匀，即成染色工作液A。

每10ml HBSS缓冲液或无血清培养基中加入20-200μl稀释过的染色液B，充分混匀，即成染色工作液B。

2. 收集样本细胞。

3. 用PBS洗涤细胞两次。

4. 用200μl染色工作液A将细胞重悬。

5. 在室温或37℃避光孵育15-20分钟。

6. 用PBS洗涤细胞。

7. 用200μl染色工作液B将细胞重悬。

8. 在室温或37℃避光孵育2-5分钟。

9. 用PBS洗涤细胞。

10. 用适量PBS重悬细胞。

11. 用荧光显微镜或流式细胞仪检测结果。最da激发为490nm，最da发射波长为515nm和617nm。

结果分析 ：

荧光显微镜下，使用490±10nm波长激发，活细胞为黄绿色，死细胞为红色。

用528 nm波长激发，能够看到红色的死细胞。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！