Caspase 10 活性检测试剂盒

产品概述

Caspase 10 活性检测试剂盒(Caspase 10 Activity Assay Kit)是采用分光光度法检测细胞或组织裂解液中Caspase 10酶活性或纯化的Caspase 10酶活性的试剂盒。 Caspase家族在介导细胞凋亡的过程中起着非常重要的作用，其中Caspase-10是近年来发现的一类含有死亡效应结构域(dead-effector domain,DED)的蛋白酶,在结构上与Caspase家族的另一成员Caspase-8有很高的同源性，通过形成死亡诱导信号复合物(death induced signaling complex,DISC)，激活自身蛋白酶活性，传递凋亡信号。Caspase-10的功能异常与许多疾病的发生有着密切的关系。 Caspase-10比色法检测试剂盒提供了一种简单方便的方法检测能识别AEVD序列的 caspases活性。本检测技术基于酶切标记了的底物AEVD -对硝基苯胺（pNA）之后对发光基团pNA进行光谱光量测量。pNA发射的光谱可以被分光光度计或者微量滴定板读数器在400-405 nm出定量检测。 本试剂盒用酶标仪检测或容量不超过100μl的分光光度检测杯检测，可用于培养细胞或新鲜组织样本的caspase-10检测。 还可以提供AFC、R110，AMC等荧光标记的Caspase-10 活性检测试剂盒。荧光法检测的灵敏度远高于分光光度法，有荧光检测条件者尽可能选择荧光法的检测试剂盒。没有荧光检测条件，可以选择比色法Caspase-10活性检测试剂盒，需要确保样品中Caspase-10活化程度足够高。

保存温度

2-8℃避光

注意事项

1.Caspase-10底物短期4℃避光保存，长期-20℃避光保存；。

2.Caspase底物在冬季气温较低时在室温时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热融解，吸头也需要放在培养箱预热，否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。融解后离心至管底部再打开螺旋盖。

3.可以用手捂住使其融解或37℃短时间水浴。

有效期

1年

检测方法

1.酶标仪

2.分光光度计

适用样本

1.细胞

2.组织

产品应用

1.酶标仪

2.分光光度计

仪器准备

1.酶标仪/分光光度计

2.离心机

3.移液器

4.冰箱

5.冰盒

试剂准备

1.PBS 缓冲液（pH7.4，实验室常用的10mM磷酸缓冲盐溶液（1X））

2.或者HBSS（Hank's Balanced Salt Solution）

耗材准备

1.离心管

2.吸头

3.一次性手套

使用方法

一、 裂解缓冲液和检测缓冲液配制

根据待测样品数准备裂解缓冲液和检测缓冲液，每1ml缓冲液中加入10μl DTT。

充分混匀置冰上备用。

二、 样品处理

A． 细胞样品

1. 收集2-5×106个细胞，在4℃，500×g条件下离心2-3分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集细胞。

2. 用冷PBS洗涤细胞两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。

3. 在细胞中加入50μl冷的裂解缓冲液，高速涡旋振荡15秒。

4. 置冰上持续振荡15-30分钟。

5. 在4℃，10000×g条件下离心15分钟。

6. 将上清吸入另一预冷的干净离心管，置于冰上或-80℃冰箱保存备用。

B． 组织样品

1. 取适量组织样本剪碎，按照50mg/100μl冷的裂解缓冲液，用组织匀浆器匀浆至无明显肉眼可见固体（或用液氮研磨），冰上振荡15-30分钟，小心将上清吸入另一预冷的干净离心管。

1. 在4℃，10000×g条件下离心5分钟。

2. 快速将上清吸入另一预冷的干净离心管，置于冰上或-80℃冰箱保存备用。

三、 对上述处理过的上清进行蛋白定量。

四、 Caspase-10活性检测

1、 取50μl大约含100-200ug蛋白的裂解上清，加入50μl检测缓冲液。

2、 再加入10μl caspase-10底物，充分混匀。在37℃下避光反应1-4小时，有黄色颜色产生即可进行检测，如果颜色变化不明显，时间可以延长，甚至孵育过夜。部分样品中激活的caspase-10水平较低，颜色变化不明显，直接上机检测，与对照组样品产品变化即可。

3、 测定A405nm或A400nm。

4、 根据凋亡诱导的细胞的吸光值与空白对照细胞的吸光值的比值计算相对的Caspase-10活性程度。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！