Caspase 3 活性检测试剂盒-荧光

产品概述

TM Caspase-3 活性检测试剂盒(Caspase 3 Activity Assay Kit)是采用荧光法检测细胞或组织裂解液中Caspase 3酶活性或纯化的Caspase 3酶活性的试剂盒。 本Caspase 3 活性检测试剂盒是基于casepase 3可以催化Caspase-3荧光底物产生绿色荧光产物AFC，AFC在400nm激发，发射波长505nm。生成的AFC量与caspase 3的活性成正比，从而可以通过测定荧光强度来检测caspase 3的活性。 Caspase(Cysteine-requiring Aspartate Protease)是一个在细胞凋亡过程中起重要作用的蛋白酶家族。Caspase 3也称CPP32、Yama或apopain，有时被写作caspase-3或caspase3，属于caspase家族的CED-3亚家族(CED-3 subfamily)，是细胞凋亡过程中的一个关键酶。Caspase 3是哺乳动物细胞中研究最多的一个caspase。Caspase-3在正常状态下以酶原的形式存在于胞浆中，没有活性；但在细胞发生凋亡阶段，Caspase-3被激活，活化的Caspase-3由两个大亚基和两个小亚基组成，裂解相应的胞浆胞核底物，最终导致细胞凋亡。Caspase 3可以剪切procaspase 3、6、7和9，并可以直接特异性剪切许多caspase底物，包括PARP，ICAD，gelsolin和fodrin等。这些由caspase 3介导的蛋白剪切是细胞凋亡分子机制的重要组成部分。另外，caspase 3在细胞核凋亡过程中也起到了关键作用，包括染色质固缩，DNA片段化等。同时caspase 3对细胞起泡也起到关键作用。 本试剂盒可用于培养细胞或新鲜组织样本的caspase-3检测。 还可以提供R110，AMC等荧光标记的Caspase-3 活性检测试剂盒。没有荧光检测条件，可以选择比色法Caspase-3活性检测试剂盒。

保存温度

2-8℃避光

注意事项

1.荧光底物长期不用可以-20℃保存。避免反复冻融。

2.荧光底物为DMSO溶液，冬季气温较低时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热融解，变成液体状态后离心至管底部再开盖。

3.可以用手捂住使其融解或37℃短时间水浴。吸头也需要放在培养箱预热，否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。

有效期

1年

检测方法

荧光酶标仪

适用样本

1.细胞

2.组织

产品应用

荧光酶标仪

仪器准备

1.荧光酶标仪

2.离心机

3.移液器

4.冰箱

5.冰盒

试剂准备

1.PBS 缓冲液（pH7.4，实验室常用的10mM磷酸缓冲盐溶液（1X））

2.或者HBSS（Hank's Balanced Salt Solution）

耗材准备

1.离心管

2.吸头

3.一次性手套

使用注意事项

1.变化不明显，可以适当延长反应时间。

2.样品适合采用Bradford法进行蛋白浓度测定。

3.如果样品中蛋白含量低，裂解样品时需设法使样品中的蛋白浓度在10mg/ml以上。

如果样品中激活的caspase水平很低，适当调节诱导细胞凋亡的时间，找一个caspase激活比较强的时间点进行检测。

Caspase-3底物避光保存，使用过程中尽量避光。

底物为DMSO溶液，冬季气温较低时在室温时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热溶解，吸头也需要放在培养箱预热，否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。

? 使用前，先将本品取出回温至室温，并对其进行简短离心使DMSO溶液集中于管底。

使用方法

一、 裂解缓冲液和检测缓冲液配制

根据待测样品数准备裂解缓冲液和检测缓冲液，每1ml缓冲液中加入10ul DTT。充分混匀置冰上备用。

二、 样品处理

A． 细胞样品

1. 收集5×106个细胞，在4℃，500×g条件下离心5分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集细胞。

2. 用冷PBS洗涤细胞两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。

3. 在细胞中加入50μl冷的裂解缓冲液，高速涡旋振荡15秒。

4. 置冰上持续振荡15-30分钟。

5. 在4℃，12000×g条件下离心15分钟。

6. 快速将上清吸入另一预冷的干净离心管，置于冰上保存备用。

B． 组织样品

1. 取适量组织样本剪碎，按照每50mg/100μl冷的裂解缓冲液，用组织匀浆器匀浆至无明显肉眼可见固体（或用液氮研磨），冰上振荡15-30分钟，小心将上清吸入另一预冷的干净离心管。

2. 在4℃，12000×g条件下离心5分钟。

3. 快速将上清吸入另一预冷的干净离心管，置于冰上或-80℃冰箱保存备用。

三、 对上述处理过的上清进行蛋白定量。

四、 Caspase 3活性检测

1、 取50ul裂解上清（含100-200ug蛋白），加入50ul检测缓冲液。

2、 再加入5ul caspase-3荧光底物，充分混匀，在37℃下避光反应1-2小时。

3、 荧光酶标仪检测。Ex=400nm，Em=505nm。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！