类志贺邻单胞菌的菌株培养与使用范围及注意事项！

                类志贺邻单胞菌的菌株培养与使用范围及注意事项！

类志贺邻单胞菌简称PS,是广泛分布在淡水环境中的细菌，被认为是食物中毒和腹泻的新病原菌。为检测其毒性和对药物的敏感性，我们于1989年对获自腹泻病人和体检人员粪标本的4株PS菌进行了检测。

一、菌种简介

平台编号：Bio-098163

规格：冻干物

拉丁属名：Plesiomonas Shigelloides

菌株名称：类志贺邻单胞菌

收藏时间：2009/9/18

原产国：德国

资源归类编码：15131122110

模式菌株：模式菌株

主要用途：分类；研究；教学

特征特性：杆菌，0.8～1.0μm×3.0μ m。革兰氏阴性。通常以极生鞭毛运动。兼性厌氧，化能异养菌。具有呼吸和发酵代谢类型，最适生长温度37℃。对葡萄糖和其他糖类能产酸但不产气。氧化酶和接触酶皆阳性。产吲哚。V-P阴性。赖氨酸、鸟氨酸脱羧酶和精氨酸双水解酶皆阳性。脂酶阴性。还原硝酸盐。大多数菌株对弧菌抑制剂2，4-二氨基 -6，7-异丙基喋啶(O／129)敏感。具有肠杆菌科的共同抗原。出现于鱼和其他水生动物和各种哺乳动物。与腹泻有关，偶尔也是人的条件致病菌。

生物危害程度：三类

致病对象：人

致病名称：菌痢

传播途径：污染食物、水

分离基物：狗粪便

培养基编号：848

培养温度：28℃

注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准）

二、分类和命名

本菌最早系1947年Ferguson和Henderson于美国密执安州一病人粪便中分离,由于此菌具有宋内氏志贺氏菌Ⅰ相抗原而引起注意,并标志为C_(27)副大肠菌,属肠杆菌科。兹后许多国家先后自人及动物粪便中分离到具有同样特性的C_(27)菌株,并对其分类学进行了研究。是感染性腹泻及食物中毒的病原体,国内外许多学者对其病原特性、生态分布、对人和动物的致病作用以及微生物学检测等方面进行了研究。从动物粪便中检出类志贺邻单胞菌的事实,概述本菌的研究进展。

三、食物中毒

类志贺邻单胞菌在水、鱼类、多种哺乳动物及人类肠道中发现，能引起人的腹泻，是一种重要的肠道致病菌，此菌可引起食物中毒。

患者症状以腹痛、腹泻为主，大多数腹泻病人为水样便，部分病人发热达37.2～38.5℃。

治疗：经抗生素治疗后2～3小时痊愈。

四、菌种的培养

1、菌种是指食用菌菌丝体及其生长基质组成的繁殖材料。菌种分为母种（一种）、原种（二种）和栽培种（三种）三。工业发酵的有用菌种，其筛选步骤包括菌种分离、初筛和复筛。

2、挑选具有某种能力的有用菌种，也称种子制备，是指菌种在一定条件下，经过扩大培养成为具有一定数量和质量的纯生产菌种的制备过程。以作接入发酵罐中进一步扩大菌体量及合成产物之用。

3、种子制备包括孢子制备和菌丝体制备 菌种制备。

4、保存在沙土管或冷冻管中的生产菌种，用无菌手续挑取少许，接入琼脂斜面培养基上，在25℃（或较高温度）下培养5～7天（或较长时间。所得孢子还需进一步用较大表面积的固体培养基以获得更多孢子（对于霉菌类孢子制备，多数采用大米、小米之类的天然培养基）。

5、将培养成熟的斜面孢子制成悬浮液，接种到扁瓶固体培养基上，于25～28℃培养14天。将成熟的扁瓶孢子于真空中抽干，使水分降至10%以下，并放入 4℃冰箱中备用。一次制得的孢子瓶可在生产上延续使用半年左右。

6、如果有些生产菌种不产孢子，如赤霉素产生菌或产孢子不多的，则可采用摇瓶液体培养制得菌丝体，作种子罐的种子。种子罐的目的是使接入有限的孢子或菌丝体迅速发芽、生长、繁殖成大量菌体。其中的培养基组分应是易于被菌体利用的碳源（如葡萄糖）和氮源（如玉米浆），及无机盐(如磷酸盐)等。作为发酵罐的种子应生命力旺盛、染色深、菌丝粗壮，无杂菌及异常菌体。接种量一般在10%～20%。

五、使用范围

(1)合成培养基。合成培养基的各种成分完全是已知的各种化学物质。这种培养基的化学成分清楚,酿酒酵母菌组成成分精确,重复性强,而且微生物在这类培养基中生长较慢。如高氏一号合成培养基、察氏(Czapek)培养基等。

(2)天然培养基。由天然物质制成,如蒸熟的马铃薯和普通牛肉汤,前者用于培养霉菌,后者用于培养细菌。这类培养基的化学成分很不恒定,也难以确定,但配制方便,营养丰富,培养效果好,所以常被采用。

(3)半合成培养基。在天然有机物的基础上适当加入已知成分的无机盐类,或在合成培养基的基础上添加某些天然成分,如培养霉菌用的马铃薯葡萄糖琼脂培养基。这类培养基能更有效地满足微生物对营养物质的需要。

六、保藏条件

斜面菌种和冻干菌种应在 2-8°C 保存。西林瓶请置于-20°C 保存。甘油请置于-80 度。

七、注意事项

1）冻干粉以 200ul-500ul 推荐培养基的液体溶解，最适接种量为 2 支 18*180 试管或者 2 支5ml 液体（请不要在锥形瓶中复苏菌种），待菌种活化成功后才能扩大培养。经过冷冻干燥保藏，菌种处于休眠状态，复苏培养时可能会延迟生长，这时需较长的培养时间；

2）若您收到的是已复苏的培养物（非冻干菌），则可以直接用于您的实验，或根据需要转接培养如有不明白之处，请务必先咨询我单位技术人员，避免不必要的损失；

3）微生物菌种应保藏于低温、清洁干燥的地方，室温放置时间过长会导致菌种衰退；

4）菌种操作应在无菌条件下进行；转种完毕，应经灭菌再做丢弃处理；

5）应根据菌种状况及时转接，冻干菌种保藏时间通常为 2-25 年；

6）菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降，应及时和微生物菌种查询网联系。

7）如若有菌种复苏不活或者污染等情况，请在收到后 2 个月内联系，逾期不予受理；

8）打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行，生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作，打管时冻干管应远离面部，保护眼睛。

9）安瓿瓶开封：用浸过 75％酒精的脱脂棉擦净安瓿管，用火焰加热其顶端，滴少量（2-3滴）无菌水至加热顶端使之破裂，用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端并将冻干管开口处在火焰上过一遍，并保持在火焰旁操作。

10）甘油管使用：使用本甘油菌时可以不用完全融解，在甘油菌表面蘸取少量涂板或进行液体培养即可。也可以完全融解后使用，但随着冻融次数的增加，细菌的活力会逐渐下降。

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