BCA蛋白定量试剂盒

BCA蛋白定量试剂盒

订购信息

产品描述

BCA蛋白定量试剂盒可对蛋白质溶液进行高灵敏度比色定量，本试剂盒不受蛋白质种类的影响。BCA(bicinchoninic acid)是一种稳定的水溶性复合物，在碱性条件下，二价铜离子（Cu2+）可以被蛋白质还原成一价铜离子（Cu+），一价铜离子可以和BCA相互作用，两分子的BCA螯合一个一价铜离子，形成紫色的络合物，该复合物为水溶性，在562nm处显示强吸光性，在0.02～2 mg/mL浓度范围内蛋白质浓度与吸光度值成线性关系，因此可以根据待测蛋白在562 nm处的吸光度计算待测蛋白浓度。

由于还原剂和螯合剂对反应有阻碍，因此本制品不适用于含有还原剂（如：β－巯基乙醇，DTT等）或者螯合剂（如EDTA）的蛋白质样品的定量。对表面活性剂的干扰影响小。可用于含有表面活性剂蛋白质溶液的定量。

产品组分

保存方法

冰袋运输，BCA试剂A和B室温保存，蛋白标准请-20℃冻存。保质期12个月。

使用方法

1. 完全融化蛋白标准品，取适量蛋白标准品稀释至终浓度为0.5 mg/mL。蛋白样品使用什么溶液溶解，标准品也应用什么溶液稀释，但是为了简便起见，也可以用0.9% NaCl或PBS稀释标准品。将标准品按0、1、2、4、8、12、16、20 μL加到96孔板的标准品孔中，加标准品稀释液补足到20 μL，相当于标准品浓度分别为0、0.025、0.05、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5 mg/mL。

2. 根据样品数量，按50体积BCA试剂A加1体积BCA试剂B(50:1)配制适量BCA工作液，充分混匀。例如5 mL BCA试剂A加100 μL BCA试剂B，混匀，配制成5.1ml BCA工作液。 BCA工作液室温24 h内稳定。

3. 加适当体积样品到96孔板的样品孔中，也加稀释液到20 μL。

4. 各孔加入200 μL BCA工作液，37℃放置20~30 min。也可以室温放置2 h，或60℃放置30 min。

5. 测定A562吸光值，540~595 nm之间的波长也可接受。根据标准曲线计算出样品的蛋白浓度。

注意事项

1. 蛋白标准品配制后可立即使用，也可以-20℃长期保存。

2. BCA法测定蛋白浓度时，颜色会随着时间的延长不断加深。并且显色反应会因温度升高而加快。如果浓度较低，适合在较高温度孵育或适当延长孵育时间以获得更好检测效果。

3. 因为延长孵育时间会引起吸光值的变化，所以在用紫外分光光度计检测时，应尽可能加快检测速度，以免先检后检产生系统误差。

4. 标准蛋白液的加量应当准确，如果加量不准确，会导致制作出来的标准曲线出现偏差，影响待测样品的浓度计算，所以一方面需要用梯度稀释的方法来配置标准蛋白液，另一方面应使用精确度高的移液枪。

Bradford法与BCA法的对比

特别提示：本公司的所有产品仅用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！