RIPA（强）细胞裂解液（带抑制剂）

RIPA（强）细胞裂解液（带抑制剂）

订购信息

产品描述

RIPA (Radio Immunoprecipitation Assay)裂解液，通过组合离子型去垢剂和非离子去污剂对组织细胞的消化作用使组织细胞崩解释放出蛋白质，是一种经典的动物组织/细胞快速裂解液。对细胞膜、胞浆亚组分、胞核成分均有较强裂解作用，适用于PAGE、Western Blotting和免疫沉淀(IP)的研究。RIPA裂解液的配方有很多种，根据其裂解液的强度大致可以分为强、中、弱三类。可以根据后续实验的需要选择，具体选择标准见下表1。

产品组分

保存方法

裂解液4℃保存，其余-20℃保存，保质期一年。

使用方法

1. 对于培养细胞样品

(1) 融解RIPA裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF (CAT:AP02L014)，使PMSF的终浓度为1 mM。

(2) 细胞裂解

对于贴壁细胞：去除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有干扰，可以不洗)。按照6孔板每孔加入150~250 μL裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞1~2 s后，细胞就会被裂解。

对于悬浮细胞：离心收集细胞，按照6孔板每孔细胞加入150~250 μL裂解液的比例加入裂解液，混匀，充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，需分装成50~100万细胞/管，然后再裂解。具体RIPA裂解液的使用量参照表2。

(3) 充分裂解后，10000~14000 rpm离心3~5 min，取上清，即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。

2. 对于组织样品

(1) 把组织剪切成细小的碎片；

(2) 融解RIPA裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1 mM；

(3) 按照每20 mg组织加入150-250 μL裂解液的比例加入裂解液。如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量，具体RIPA裂解液的使用量参照表2。

(4) 用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。

(5) 充分裂解后，10000~14000rpm离心3~5 min，取上清，即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。

注意事项

1. RIPA裂解液的裂解产物中经常会出现一小团透明胶状物，属正常现象。该透明胶状物为含有基因组DNA等的复合物。在不检测基因组DNA结合特别紧密的蛋白的情况下，可以直接离心取上清用于后续实验；如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白，则可以通过超声处理打碎打散该透明胶状物，随后离心取上清用于后续实验。如果检测一些常见的转录因子，例如NF-kappaB、p53等时，通常不必进行超声处理，就可以检测到这些转录因子。

2. RIPA（强）裂解液含有较高浓度的去垢剂，不能用Bradford法测定蛋白。

3. 如果组织样品本身非常细小，可以适当剪切后直接加入裂解液裂解，通过强烈vortex使样品裂解充分。然后同样离心取上清，用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便，不必使用匀浆器，缺点是不如使用匀浆器那样裂解得比较充分。

4. 通常6孔板每孔细胞加入150 μL裂解液已经足够，但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到200 μL或250 μL。

表1： 不同RIPA裂解液的选择标准

表2: RIPA裂解液的使用量

特别提示：本公司的所有产品仅用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！