Western/IP细胞裂解液（带抑制剂）

Western/IP细胞裂解液（带抑制剂）

产品描述

Western及IP裂解液是一种在非变性条件下裂解细胞的裂解液，对胞浆亚组分、胞核成分均有较强裂解作用，有利于胞浆蛋白、核蛋白、胞浆磷酸化蛋白及细胞核转录因子的提取。适用于PAGE，Western，免疫沉淀(immunol precipitation，IP)和免疫共沉淀(co-IP)。

产品组分

保存方法

裂解液4℃保存，其余-20℃保存，保质期一年。

使用方法

1. 对于培养细胞样品

(1) 融解Western及IP裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1 mM。

(2) 细胞裂解

对于贴壁细胞：去除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有干扰，可以不洗)。按照6孔板每孔加入100~200 μL裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞1~2 s后，细胞就会被裂解。

对于悬浮细胞：离心收集细胞，用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞加入100~200 μL裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必需分装成50~100万细胞/管，然后再裂解。大团的细胞较难裂解充分，而少量的细胞由于裂解液容易和细胞充分接触，相对比较容易裂解充分。具体Western/IP裂解液的使用量参照表1。

(3) 充分裂解后，10000~14000 rpm离心3~5 min，取上清，即可进行后续的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

2. 对于组织样品

(1) 把组织剪切成细小的碎片；

(2) 融解Western及IP细胞裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1 mM。

(3) 按照每20 mg组织加入100~200 μL裂解液的比例加入裂解液，如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量。具体Western/IP裂解液的使用量参照表1。

(4) 用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。   

(5) 充分裂解后，10000~14000 rpm离心3~5 min，取上清，即可进行后续的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

注意事项

1. 用SDS裂解液裂解得到的蛋白样品，含有较高浓度的去垢剂，不能用Bradford法测定蛋白浓度。

2. 通常6孔板每孔细胞加入100 μL裂解液已经足够，但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用

量到150 μL或200 μL。

3. 如果组织样品本身非常细小，可以适当剪切后直接加入裂解液裂解，通过强烈vortex使样品裂解充分。然后同样离心取上清，用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便，不必使用匀浆器，缺点是不如使用匀浆器那样裂解得比较充分。

表1： Western/IP细胞裂解液的使用量参考表

特别提示：本公司的所有产品仅用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！