Mouse--免疫组化试剂盒(HRP-Polymer)
产品简介
(HRP-Polymer)免疫组化试剂盒(Rabbit)是高敏感性试剂盒。用聚合标记方法将过氧化物酶连接到二抗上,形成超大分子抗体-酶聚合物,替代传统方法中的二抗和三抗。这种聚合物拥有强大的信号放大能力,同时有很强的组织细胞渗透力,特别适合免疫组化的应用。此系列检测试剂与传统的三步法比较具有简单,快速,高敏感,低背景等特点。
保存:
4℃可保存一年,应避免冷冻。
自备试剂及耗材:
1. 防脱玻片(货号:WH1025)
2. PBS(pH7.2-7.6)(货号:WB6018/WB6019)
3. EDTA抗原修复液(货号:WH1034)或枸橼酸盐缓冲液(货号:WH2007)
4. 内源性过氧化物酶阻断剂(WH1028/WH1029)
使用方法:
石蜡切片热修复抗原染色程序:
1、制备切片,常规脱蜡至水。
2、3%H2O2,室温10 分钟以灭活内源性酶。蒸馏水洗2 分钟×3 次。
3、根据抗原抗体情况,必要时对切片进行抗原热修复或消化处理。
4、滴加封闭液,室温10分钟。甩去多余液体, 不洗。
5、滴加适当稀释的一抗(兔IgG),20-37 ℃1~2 小时或4℃过夜。0.01M PBS 洗2分钟×3次。(一抗的稀释度、孵育时间、温度与染色强度、背景有直接关系。一般来说,阳性染色强度不够时,可提高一抗浓度和延长孵育时间;背景过高时,可降低一抗浓度和缩短孵育时间。)
6、滴加聚合HRP 标记抗兔IgG,37℃孵育30 分钟,PBS 或TBS 冲洗,2 分钟×3 次。
7、DAB 显色:取1ml 蒸馏水,加试剂盒中A,B,C 试剂各1 滴,混匀后加至切片。室温显色, 镜下控制反应时间,一般5-30 分钟。蒸馏水洗涤。
8、 苏木素轻度复染、脱水,透明,封片、观察。
B.血涂片,细胞和冰冻切片染色程序
1.载玻片经防脱片剂处理(Poly-L-Lysine)。抗凝血经分层离心后涂片;培养细胞也可涂片或贴片生长;冰冻切片室温风扇吹干。
2.固定方案用4%多聚甲醛或丙酮固定10-20 分钟。
3.30%H2O2 1 份+纯甲醇50 份混合,室温浸泡30 分钟,以灭活内源性过氧化物酶。蒸馏水洗1-2 次。
其余步骤和石蜡切片3-8 步相同。
如果冰冻切片直接染色结果不理想时,可以参照石蜡切片对切片进行热
特别提示:本公司的所有产品仅用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
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