β-gal半乳糖苷酶检测试剂盒

β-gal半乳糖苷酶检测试剂盒
β-Galactosidase Kit 

产品及特点 β-半乳糖苷酶（β-Galactosidase, β-GAL；EC 3.2.1.23）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，能够催化β半乳糖苷化合物中的β半乳糖苷键水解，此外还具有转半乳糖苷的作用。β-GAL 不仅可为植物的快速生长释放储存的能量，还能在正常的多糖代谢、细胞壁组分代谢以及衰老时细胞壁降解过程中催化多糖、糖蛋白以及半乳糖脂末端半乳糖残基的水解，释放自由的半乳糖。

本产品是分光光度法测定β-GAL 活力的，测定原理为β-GAL 分解对-硝基苯-β-D-吡喃半乳糖苷生成对-硝基苯酚，后者在 400 nm 有最大吸收峰，通过测定吸光值升高速率来计算β-GAL 活性。

运输及保存 低温运输，4℃保存，其中试剂 A 需-20℃保存，有效期半年。

自备试剂 无

使用方法 正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

一、酶液提取

1. 细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：酶提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1 mL 酶提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200 W，超声 3 秒，间隔 10 秒，重复 30 次）；15000 g 4℃离心 10 分钟，取上清，置冰上待测。

2. 组织：按照组织质量（g）：酶提取液体积（mL）为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1 g 组织，加入 1 mL 酶提取液），进行冰浴匀浆。15000 g

4℃离心 10 分钟，取上清，置冰上待测。

二、测定操作步骤

1. 分光光度计预热 30 分钟以上，调节波长至 400 nm，蒸馏水调零。

2. 取出试剂 A，临用前向试剂瓶中加入 5 mL 蒸馏水，充分溶解备用，制备成溶液 A 工作液（用不完的溶液 A 仍需-20℃保存）。3. 样本测定（在 EP 管中依次加入下列试剂）：

试剂名称 对照管（μL） 测定管（μL）

样本 50 50

蒸馏水 200 0

溶液 A 工作液 0 200

溶液 B 250 250

迅速混匀，放入 37℃准确水浴 30 分钟

溶液 C 1000 1000

充分混匀，400 nm 处测定吸光值 A，计算ΔA=A 测定-A 对照。每个测定管需设一个对照管。

三、酶活性计算公式

标准条件下测定的回归方程为 y=0.00543x -0.0027；x 为标准品浓度（nmol/mL），y 为吸光值。

注：V 反总：反应总体积，0.5 mL；V 样：反应中样本体积，0.05 mL；V 样总：加入酶提取液体积，1 mL；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细胞或细菌总数，500 万；T：反应时间，30 分钟。

1. 按照样本蛋白浓度计算：

酶活性定义：每 mg 组织蛋白每分钟产生 1 nmol 对-硝基苯酚定义为一个酶活力单位。

β-GAL 活力(nmol/min/mg prot)=[(ΔA+0.0027)÷0.00543×V 反总]÷(V 样×Cpr)÷T=61.39×(ΔA+0.0027) ÷Cpr

如果需要另外测定，建议使用本公司 BCA 蛋白质含量测定试剂盒。

2. 按照样本鲜重计算：

酶活性定义：每 g 组织每分钟产生 1 nmol 对-硝基苯酚定义为一个酶活力单位。

β-GAL 活力(nmol/min/g 鲜重)＝[(ΔA+0.0027)÷0.00543×V 反总]÷(W×V 样÷V 样总)÷T=61.39×(ΔA+0.0027) ÷W

3. 按细菌或细胞密度计算：

酶活性定义：每 1 万个细菌或细胞每分钟产生 1nmol 对-硝基苯酚定义为一个酶活力单位。

β-GAL 活力(nmol/min/104cell)=[(ΔA+0.0027)÷0.00543×V 反总]÷(500×V 样÷V 样总)÷T=0.123×(ΔA +0.0027)

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！