BCIP/NBT显色试剂盒

BCIP/NBT显色试剂盒

BCIP/NBT Chromogenic Kit

BCIP即5-溴-4-氯-3-吲哚-磷酸盐(5-bromo-4-chloro-3-inodlylphosphate)。NBT即四唑淡蓝(Nitro-Blue-Tetrazolium)，为深蓝色无定形微溶物质。当二者存在时，在碱性磷酸酶作用下，NTB被还原形成不溶性的蓝色(在硝酸纤维素膜上)或紫色(在尼龙膜上)沉淀，据此颜色反应来鉴定碱性磷酸酶。该反应的示意图如下：


产品特点：
1．即开即用，省去自配溶液的麻烦。
2．条件经过优化，最低可以检测到0.5fmol的靶分子(在硝酸纤维素膜上)，并且背景低，不需要自己摸索。
3．与硝酸纤维素膜和尼龙膜兼容，也可用于琼脂糖凝胶原位杂交。
4．适用于中等灵敏度检测各种印迹膜检测，包括Southern杂交、Northern杂交、Western blot沉淀、免疫组化等。如果要高灵敏度检测，最好使用ECL 检测。
5．肉眼观察实验结果，直观简单，不需要额外的试剂和仪器。

试剂盒组成：

注意：本产品可以配制100mL BCIP/NBT 显色液，具体使用次数与膜的大小密切相关。

储存条件：常温运输，4℃避光保存，有效期一年。

自备试剂：超纯水、结合有AP 标记的探针或抗体的印迹膜。

使用方法：

一、配制溶液
1．按每cm2 印迹膜需要0.1mL BCIP/NBT 显色液的比例计算所需显色液的用量，并按下表的配方配制的所需量的BCIP/NBT 显色液待用。说明：下表以10mL 为例，用户需要根据计算得到的所需显色液体积按比例增减各成分用量。

注意：此溶液必须在1小时内使用。
2．用10×AP缓冲液配制跟NBT-BCIP显色液等体积的1×AP缓冲液待用。

二、显色
3．同钝头镊子将印迹膜浸入到新鲜配制的1×AP缓冲液中，脱色摇床上摇晃5分钟。本方法也可以用于琼脂糖凝胶原位杂交，处理方法一样，只是把经过AP 标记探针或抗体杂交的印迹膜改成经过AP 标记探针或抗体杂交的凝胶。
4．同钝头镊子将印迹膜浸入到新鲜配制的BCIP/NBT 显色液中(每cm2 印迹膜需要0.1mL BCIP/NBT 显色液)，室温避光静置显色直到看见所需条带。在硝酸纤维素膜上，条带将呈现蓝色；在尼龙膜上，条带将呈现紫棕色。注意：显色过程中不要摇晃，否则有色沉淀物不容易聚集。高丰度的靶分子可能只需5-30分钟显色，低丰度的靶分子可能需要24小时显色。显色反应一般会在24小时结束，所以显色时间没有必要超过24小时。37℃放置可加速显色反应，缩短显色时间。
5．显色结束后，将印迹膜转移到盛有超纯水的托盘中摇晃以终止显色反应。数分钟后需要换水，共三次。
6．用吸水纸吸干膜上的水分，照相或扫描处理后避光干燥保存印迹膜。对硝酸纤维素膜，如果用二甲苯将膜浸湿，则条带会增强约5倍(膜变得透明，使背景变低，条带更明显所致)。
7．如果不避光保存条，印迹膜上的条带会逐渐褪色。硝酸纤维素膜上的颜色不能脱去，如果想脱去尼龙膜上条带的颜色，可以将膜浸入到装在玻璃容器的DMF溶液中，再进行热水浴直到颜色脱去(需要在通风柜中进行)。硝酸纤维素膜上的条带不能脱去。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！