12.5%SDS-PAGE蛋白电泳套装(见一站式SDS-PAGE电泳套装)

植物专用蛋白酶抑制剂混合液，100X

One-Stop SDS-PAGE Pack 

SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)是目前电泳法变性分离蛋白质的主要方法，但是单独配制各种溶液十分繁琐，为此我们公司开发了本产品。

产品特点：
1．一站式，即开即用，用户不需单独准备各种成分，十分方便。
2．安全，将实验人员接触粉末状丙烯酰胺的可能降到最低。
3．灵活，分开提供的丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺便于配制各种比例和浓度的SDS-PAGE，满足分离各种大小不同的蛋白质的要求。
4．使用改良的浓缩胶缓冲液，由于其含有染料，制备的浓缩胶呈蓝色，便于上样时识别加样孔。
5．电泳后可直接用于考染、银染、Western杂交等实验。

产品组成：

储存条件：常温运输和保存，但TEMED和5×SDS-PAGE上样液需低温运输，分别在4℃和-20℃有效期一年。

自备试剂：去离子水。

使用方法：
1．第一次使用本产品时需先配制30%丙烯酰胺溶液:在本产品提供的装有60克丙烯酰胺干粉的塑料瓶中加入146mL自备的去离子水，充分摇晃直到溶解即得200mL 30%丙烯酰胺溶液(用手大约摇10-20分钟)。
2．第一次使用本产品时还需配制30%丙烯酰胺-甲叉双丙烯酰胺(19:1)溶液(30% AB溶液，下同): 不同实验需要加入不同比例的甲叉双丙烯酰胺。对SDS-PAGE电泳，丙烯酰胺与甲叉双丙烯酰胺比例一般在19:1左右，因为此时PAGE胶的孔径最小，分辨率最高。制备方法是将3g甲叉双丙烯酰胺干粉加入到200mL上步配好的30%丙烯酰胺溶液中(注意：甲叉双丙烯酰胺干粉有神经毒性，避免吸入粉末)。配好的30%ＡＢ溶液最好4℃避光保存并在１月内用完。
3．根据平板的面积和胶的厚度估计需要配制的浓缩胶和分离胶的体积。并根据要分离的蛋白质的大小确定选择浓缩胶和分离胶的浓度，参考下表：

注：如果上样体积少于10μL，可以不需要浓缩胶。
4．配制10%的APS(过硫酸铵)：称0.1克过APS干粉到1mL去离子水中，摇晃溶解。配制好的10%的APS溶液可以在4℃存放一周。
5．配制分离胶：在一个25mL的三角瓶中，先按下表的用量加入水、30%ＡＢ溶液和4×分离胶缓冲液。以下是配制10mL胶的用量，更大体积则各成分用量需按比例增加。丙烯酰胺溶液有神经毒性，一定要戴手套操作。

6．配制浓缩胶(一般使用4%的浓度)：在一个25mL的三角瓶中，先按下表的用量加入水、30%A B溶液和4×浓缩胶缓冲液。以下是配制10mL 4%浓缩胶的用量，丙烯酰胺溶液具有神经毒性，一定要戴手套操作。

7．将分离胶和浓缩胶溶液摇晃混匀，抽真空10-15分钟以去除溶液中的氧气(氧气能抑制丙烯酰胺聚合反应，不去除将影响丙烯酰胺聚合反应)。
8．分别加入50μL 10%APS和30-50μL TEMED(这是配制10mL分离胶和浓缩胶的用量，更大体积的胶则用量需按比例增加)，迅速摇匀。
9．先灌分离胶，在胶的液面距离顶部1.5 cm的时候，停止灌胶。
10．由于分离胶比重较大，可以立即在上面灌浓缩胶，但灌注时必须小心，不要破坏分离胶和浓缩胶的液面，在浓缩胶液面达到顶部时停止灌胶，插入梳子，室温聚合30-60分钟。如果不能做到小心灌浓缩胶，则必须待分离胶室温聚合30-60分钟后再灌制。
11．拔出梳子，用1×SDS-PAGE电泳液冲洗加样孔。
12．将凝胶板固定在电泳装置上，往上槽和下槽加入足够的1×SDS-PAGE电泳液。本产品提供20升的SDS-PAGE电泳液干粉，将所有干粉溶解在2 L水中即得10×SDS-PAGE电泳液，用时再稀释成1×工作液。
13．在蛋白质样品中加入5×SDS-PAGE上样液(4μL样品中加1μL上样液)，100℃煮沸3～5分钟。短暂离心，取上清上样。
14．先用10 mA的电流电泳(对0.75mm厚×14cm×14cm的胶)直到染料进入从浓缩胶进入分离胶。
15．将电流增加到15 mA，直到染料进入分离胶底部时终止电泳，取出凝胶进行后续的实验处理。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！