酵母Y1HGold化学感受态细胞

酵母Y1HGold化学感受态细胞

Y1HGold Chemically Competent Cell

产品及特点 Y1HGold菌株是Clontech公司开发的GAL4-AbA酵母单杂系统用菌株，MATα型，可 直接转化质粒进行筛库试验。Transformation marker为：ura3，leu2；报告基因为： AbAr。Y1HGold-GAL4-AbA 酵母单杂系统需要两种质粒配套使用：pAbAi 和PGADT7。 质粒pAbAi的筛选标志为URA，用于表达 pBait-AbAi construct（1-3个bait DNA序列 重复串联后克隆到pAbAi中）；质粒pGADT7的筛选标志为LEU，用于表达AD（GAL4 C 端768-881位氨基酸）与目标蛋白（Prey）的融合蛋白。GAL4-AbA酵母单杂系统原理： Aureobasidin A（AbA）是一种环酯肽抗生素，在低浓度（0.1-0.2 μg/mL）下即可对酵 母产生毒性。基因组中整合了pBait-AbAi的酵母菌株（Bait-Reporter Yeast Strains）， 当猎物蛋白（Prey）结合到诱饵序列（Bait DNA）上，GAL4 AD就会激活AbAr的表达， 从而能够在含有抗生素AbA的培养基上生长。AbAr与营养缺陷报告基因相比具有更低背景 的优点，可以降低酵母单杂假阳性发生的概率。Y1HGold感受态细胞经特殊工艺制作， -80℃可保存三个月，pGADT7质粒检测转化效率>10 4 cfu/μg DNA。 

Y1Hgold的基因型是：MATα, ura3-52, his3-200, ade2-101, trp1-901, leu2-3, 112, gal4Δ, gal80Δ, met-, MEL1。

运输及保存 感受态细胞干冰运输、-80℃保存，Carrier DNA -20℃保存；PEG/LiAc 4℃保存；有效

期半年。 自备试剂 目的 DNA、YPDA、 SD 培养基等

使用方法 1. 取 pBait-AbAi 质粒 5μg，BstBI 或 BbsI 酶切 1 小时，回收。

2. 取 100μL 冰上融化的 Y1HGold 感受态细胞，依次加入预冷的线性 pBait-AbAi 质粒1-5 μg（体积不高于 15 μL），Carrier DNA（95-100℃ 5 min，快速冰浴，重复一次）10μl，PEG/LiAc 500μL 并吸打几次混匀，30℃水浴 30 min（15 min 时翻转 6-8 次混匀）。

3. 将管放 42℃水浴 15 min（7.5 min 时翻转 6-8 次混匀）。

4. 5000 rpm 离心 40 s 弃上清，ddH2O 400μL 重悬，离心 30s 弃上清。

5. ddH2O 50μL 重悬，涂 SD/-Ura 平板，29℃培养 72 h。

6. 挑取 5-10 个克隆，用 PCR 方法确定 pBait-AbAi 整合到 Y1HGold 基因组中，PCR阳 性 菌 株 在 SD/-Ura 平 板 划 线 ， 29 ℃ 培 养 72 h ， 4 ℃ 保 存 ， 此 菌 株 即是Y1HGold[Bait/AbAi] 菌株。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！