大肠杆菌TB1感受态细胞

大肠杆菌TB1感受态细胞

E.coli TB1 Rosetta Competent Cell

本感受态细胞来源于JM 83，是JM 83 hsdR型，只含有大肠杆菌RNA polymerase，缺少BL21(DE3)菌株的T7 RNA polymerase，适合NEB公司的pMAL 系列质粒原核蛋白表达(The pMAL vectors use the E. coli RNA polymerase)，不能用于pET 系列质粒的表达，具有链霉素抗性。TB1感受态细胞由特殊工艺制作，经pUC19质粒检测转化效率高达108cfu/μg。

菌株基因型：F– ara Δ(lac-proAB)rpsL(Strr)[φ80 dlacΔ(lacZ)M15] thi hsdR。

储存条件：干冰运输、-80℃保存，有效期半年。

自备试剂：目的DNA、SOC或LB培养基等。

使用方法：
1. 取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100μL，根据实际情况分装使用。
以下实验以50μL感受态细胞为例。
2. 待感受态细胞融化后，向感受态细胞悬液中加入目的DNA(根据实际情况加入适量的DNA，通常100μl感受态细胞能够被1 ng超螺旋质粒DNA 所饱和)，用移液器轻轻吹打混匀，冰浴25分钟。
3. 42℃热击45秒，迅速将离心管转移到冰浴中并静置2-3分钟，晃动会降低转化效率。
4. 每个离心管中加入700μl 无菌的2YT或LB培养基(不含抗生素)，混匀后置于37℃摇床，200rpm 振荡培养60分钟使菌体复苏。
5. 5000rpm离心一分钟收菌，留取100μL左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。
6. 将平板倒置于37℃培养箱中培养12-16小时。

注意事项：
1. 涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA 总量较多，可取少量转化产物涂布平板；若转化的DNA 总量较少，可取200-300μL转化产物涂布平板。
2. 混入质粒时应轻柔操作。
3. 诱导时，IPTG浓度可选(0.1-2mM 均可)。
4. 为获得需要量的蛋白，最佳诱导时间，温度，IPTG浓度需实验者优化。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！