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免DNA提取PCR试剂盒(PCR直扩试剂盒)
Cell Lysate PCR Mix
本产品是可以直接用新鲜的动物、植物、细菌样品的裂解液进行PCR扩增的试剂盒。
产品特点:
1. 操作简单,免去DNA提取、蛋白去除、RNA去除等步骤,5分钟即得用于PCR的模板。
2. 兼容性广,可以用于几乎所有的分子生物学样品,包括细菌、昆虫、真菌、各种植物、各种动物、法医样品(包括全血液、血痕、精斑、唾液、毛发、组织样品、口腔细胞和FTA卡)、石蜡组织切片等。
3. 提供离心管专用研磨杵,便于处理棘手样品。
4. 环保健康,不使用任何有毒有害的试剂。
5. 尤其适用于大规模育种筛选和临床筛选。
6. 本试剂盒可以处理100份不同的样品,足够100次PCR实验。
试剂盒组成:
成分 | 规格 |
溶液A | 12ml |
溶液B | 12ml |
PCR MagicMix 3.0 | 1ml |
研磨杵 | 100只 |
说明书 | 1份 |
储存条件:溶液A、溶液B和离心管专用研磨杵可以常温和放置,PCR MagicMix 3.0需要低温运输、-20℃保存。有效期一年。
使用方法:
1. 首次使用本产品时需要详细检查溶液A和溶液B是否有结晶析出。如果有需要37℃溶解后摇晃均匀待用。未用完部分可以放常温保存。
2. 根据材料不同参考下表取少量样品到1.5mL塑料离心管中。
样品种类 | 取样量 |
动物组织 | 1-5mg |
鼠尾 | 2mm长 |
血液样品 | 不超过20μl |
植物叶片 | 1-5mg |
植物种子(去皮) | 1-5mg |
酵母培养物 | 0.2-0.5mL培养物沉淀 |
细菌培养物 | 0.2-0.5mL培养物沉淀 |
注意:未列出样品,用户需要自己摸索最佳用量。对富含多醌多酚的植物材料(如棉花),组织使用量最好不要超过0.5mg。
3. 加入100μl溶液,确保溶液A完全将样品淹埋。
4. 用研磨杵小心将样品在离心管内捣碎。血液一般情况捣碎30秒即可;实体组织需要捣碎到溶液的颜色变浑浊(植物叶片的话,溶液的颜色将变成绿色)。如需更多研磨杵,可从我司另购。对棘手的样品,还可以增加95℃保温10-60分钟一步,待温度冷却到室温后再进入下一步。残留的实体组织碎片不会影响后续试验。
5. 加入100μL溶液B,震荡10秒混匀。
6. 常温12000rpm离心2分钟。
7. 将上清液转移到一个干净的1.5mL离心管中。如果不用,可以放-80℃长期保存。如果用于后续PCR,请直接进入下步。
8. 直接用裂解液作为模板设置30μl体系的PCR反应体系如下:
成分 | 用量 |
PCR MagicMix 3.0 | 15μl |
细胞裂解液(来于上步) | 1-5μl |
自备PCR引物1(10uM) | 1μl |
自备PCR引物2(10uM) | 1μl |
补水到 | 30μl |
注意:裂解液体积最好不要超过PCR体积的1/10。如果需要增加模板的加入量,则PCR体系应该相应的增加。如果加入5μL裂解液,则可以使用50μL的PCR体系。
9. 放入PCR仪中进行PCR,PCR参数需要根据引物Tm值和靶分子长度等参数设置。一般不低于35次循环。
10. PCR结束后取5-10μL直接上样电泳(本产品不需要上样液),红色染料电泳速度相当于50bp DNA片段。
注意事项:
1.如果反应体系不是30μl,各成分需要等按比例增加或减少。
2.如果细胞裂解液中有不明PCR抑制物(植物、土壤和血液等DNA样品常含此类抑制物),可以在PCR体系中加入1/10的PCR抑制物清除剂(BTN60804,30μL体系中加3μL),可能会对PCR有帮助。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
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