玻璃珠法大提柱式真菌DNA提取试剂盒

玻璃珠法大提柱式真菌DNA提取试剂盒（玻璃珠法大提柱式真菌DNAout）

Glassbeads Large-Scale Column Fungal DNAout 

产品及特点 本产品在柱式真菌 DNAout（CAT#:70901）基础上改良而的的大提升级产品，主要用于大量快速从各种真菌材料中提取基因组 DNA。跟柱式真菌 DNAout 相比，它具有下列特点：

1. 处理量大，一次可以处理 1-3g 各种真菌组织。

2. 纯度高，OD260/280 一般在 1.8 以上。不含污染和抑制剂，得到的 DNA 可以不经稀释直接用于酶切、PCR、real-timePCR、multiplex PCR、RAPD、RELP、AFLP、Southern Blotting，microsatellite analysis 等各种后续分子生物学实验。

3. 采用玻璃珠法破碎细胞，属于物理方法，远比基于蜗牛酶或破壁酶的温和化学破壁法重复性好，也不容易带入外援真菌 DNA（注：文献报道蜗牛酶或破壁酶中常常有外源真菌 DNA 污染，用于提取真菌 DNA 往往会造成污染。这些文献可从本公司本产品介绍网页下方下载）。

4. 产率一般在 10-100ug/g 真菌样品。离心吸附柱最大吸附量为 800ug。

5. DNA 片段长度一般在 20-40kb 左右。

6. 适用范围广，适用于度大多数真菌材料，包括酵母（S.cerevisiae、S.pomb、Pichiapastoris）等。

运输及保存 常温运输,4℃保存，有效期一年。

自备试剂 无。

使用方法 1. 对菌液：取 60-100 mL 过夜培养的真菌菌液 (OD600一般在 1 以上)到干净的塑料

离心管中，12000 rpm 离心 2 分钟弃上清留沉淀。

2. 对菌落：用接种针在在培养基上刮取尽可能多的真菌菌落（约 1 g），转移到装有20 mL 无菌水的干净的塑料离心管中，洗涤下接种环上的菌体。12000 rpm 离心2 分钟弃上清留沉淀。

3. 对孢子材料，一般取 1-3 g 左右，直接加入到离心管中，在材料中加入无菌水 20mL，振荡半分钟后 12000rpm 离心 2 分钟弃上清留沉淀。

4. 沉淀中加入 10 mL 溶液 A 和 10 克的玻璃珠，涡旋震荡 10 分钟，可以延长震荡时间。

5. 加入 10 mL 的溶液 B，涡旋震荡 5 分钟，12000rpm 离心 2 分钟，将上清液全部转移到一个 50 mL 的干净的塑料离心管中。

6. 在上清中加入 3 倍体积的溶液 C，颠倒数次混匀后，分三次上离心吸附柱，每次上柱后均先室温放置 2 分钟，然后 12000rpm 离心 1 分钟，倒掉穿透液，再第二次上柱，重复上面的操作，直到挂柱步骤完成。

7. 将 20 mL 通用洗柱液加入离心柱，12000rpm 离心 1 分钟，弃穿透液。

8. 重复上步操作一次。

9. 12000rpm 空甩 1 分钟去除残留液体。

10.将离心柱放置在一新的 50 mL 塑料离心管中，加入 500uL DNA 洗脱液 2.0。

11.室温放置 5 分钟后 12000rpm 离心 1 分钟，管底即为真菌 DNA 样品，吸取离心管中的 DNA 溶液重新滴加在吸附柱上，离心洗脱以收集更多的 DNA。

12.所得 DNA 可立即使用，也可长期保存在－20℃。

13.注：如离心机转速不能达到 12000rpm，可以用最大转速离心 10-15min 代替12000rpm 离心 1-2min。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！