柱式葡萄球菌RNA提取试剂盒（柱式葡萄球菌RNAout）

柱式葡萄球菌RNA提取试剂盒（柱式葡萄球菌RNAout）

Staphylococcus RNA Column extraction kit

产品及特点 分枝杆菌属（Mycobacterium）是极为古老的细菌，与人类的疾病相关的就有

25 种以上，包括引起结核病的结核分枝杆菌（Mycobacteria tuberculosis）。近年来由于多重耐药性分枝杆菌的出现，分枝杆菌再次成为人们关心的细菌。PCR快速诊断是目前检测分枝杆菌的主流方法，但由于此类细菌具有十分独特的坚硬的细胞壁，快速提取其基因组 RNA 一直是十分棘手的技术问题。具有下列特点：

1. 操作简单，客户不需要准备额外的试剂。

2. PCR 检测灵敏度一般在 10-100 CFU/mL 样品。

3. 既可以使用培养的细菌，也可以使用痰液、精液、血液、脑脊液等样品。

4. 价廉物美，与国外同类产品相比质量相当，但价格便宜。

5. 安全无毒，本试剂盒对人体无害，无腐蚀性和刺激性气味。

6. 本产品只能用于科研。

运输及保存 常温运输及保存，但化痰液成分（干粉）需要低温运输、-20℃保存，有效期一年。

自备试剂 TE 缓冲液，氯仿。

使用方法 注意：试验所用的实验室环境、耗材等均需要 RNase-free。

一: 培养的分枝杆菌样品的预处理

1. 刮取培养的分枝杆菌到 0.5 mL 自备 TE 缓冲液中。

2. 80℃放置 20 分钟以杀灭细菌。

3. 3000 g 室温离心 15 分钟，弃上清。

4. 将细菌沉淀放-20℃冰箱备用或直接进入细菌基因组 RNA 提取步骤。

二: 含分枝杆菌的痰液样品的预处理

1. 将痰液样品(0.5mL-2mL)加入到干净的 10 mL 或 15 mL 塑料离心管中。

2. 加 2mL 的自备蒸馏水，在加入 100mg 化痰液干粉，充分混合均匀后室温放置 15-30 分钟。如果痰很浓，可以延长保温时间。

3. 3000 g 室温离心 15 分钟，弃上清。

4. 将细菌沉淀放-20℃冰箱备用或直接进入细菌基因组 RNA 提取步骤。

三:分枝杆菌菌基因组 DNA 的提取

1. 向上述有分枝杆菌沉淀的离心管中加入 0.3mL 溶液 A，用枪充分吹打细菌沉淀，确保细菌全部裂解，没有块状物。此时裂解物总体积 0.4mL。加入约 0.2倍体积的自备氯仿(10.4mL 裂解物需 0.1 mL 氯仿)，振荡器上充分振荡混均30 秒。

2. 12000-15000 g 室温离心 3 分钟。将上清液（约 0.3mL）转移到离心吸附柱中。注意：离心后下层有机相和中间层含有 DNA 和蛋白质，避免触及，否则将产生蛋白质和 DNA 污染。

3. 加入等体积（约 0.3mL）的溶液 B，充分混匀后全部上柱。

4. 12000-15000 g 室温离心半分钟，弃收集管中的穿透液。

5. 加 0.7 mL 通用洗柱液到离心吸附柱中，室温离心半分钟，弃收集管中的 穿透液。一次洗涤一般足够去除杂质。但如果样品 OD260/280 比值不高，可以再用 0.3 mL 通用洗柱液重复此步一次。

6. 室温 12000-15000 g 离心半分钟。此步十分重要，否则残留的通用洗柱液会影响 RNA 的使用。

7. 将离心吸附柱转移到一自备的 RNase-free 收集管中，加入 30-100uL RNA洗脱液，室温放置两分钟。

8. 室温离心半分钟，离心管中溶液即为 RNA 样品，可以立即使用或存放于-80℃待用。

9. RNA 完整性的电泳检测：如果需要做 Northern 杂交，强烈建议用户使用甲醛变性胶进行 RNA 电泳，因为非变性胶不能分离所有的 RNA 分子。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！