mRNA 纯化试剂盒

mRNA 纯化试剂盒

mRNA Isolation Kit

本产品就是基于此原理开发的、专门用于从总RNA中提取mRNA的试剂盒。

开发背景：
构建cDNA文库、、蛋白质体外翻译和RT-PCR检测稀有的mRNA等研究常常需要从总RNA中分离mRNA。mRNA只占总RNA的1%左右，但由于带poly（A）尾巴，所以可以通过与Oligo（dT）纤维素的亲和结合而与其他RNA（如rRNA、tRNA等）分离开。

试剂盒特点：

• 一站式，，即开即用，非常方便。
  

• 一次可以处理约10-15μg总RNA，从中可得0.1-0.5μg左右的mRNA。
  

• Oligo（dT）纤维素吸附能力强，每克可以吸附50-80 OD的mRNA，相当于2000-3000μg mRNA。
  

• 离心法、只需要离心就可以完成，免去了常规的灌柱、洗柱等繁琐操作。
  

• 得到的mRNA可以直接用于构建cDNA文库、蛋白质的体外翻译和RT-PCR。
  

• 本试剂盒足够25次微量mRNA提取实验。

试剂盒组成：

运输及保存：
常温运输，收到货后Oligo(dT)纤维素最好放-20℃长期保存，有效期一年。

使用方法：
本产品提供25mg Oligo(dT)纤维素，每克Oligo(dT)纤维素能够结合50-80OD的mRNA。

• 将250μL结合液加入到装有25mg Oligo(dT)纤维素的离心管中。
  

• 洗涤纤维素：取10μL（相当于1mg Oligo (dT)纤维素）与0.5mL结合液混匀，室温放置5分钟。10μL相当于1mg Oligo (dT)纤维素。剩余部分放-80℃保存。1000g离心30秒，小心吸弃结合液后留Oligo (dT)纤维素沉淀待用。
  

• 将自备的总RNA 100μL（如果体积不足100μL，用RNase-free水补足），65℃加热5分钟。
  

• 加入等体积（100μL）的结合液，混匀后冷却到室温。
  

• 全部转移到装有Oligo(dT)纤维素的离心管中，混匀后室温放置5分钟，期间颠倒混匀数次。
  

• 4℃ 1000g离心5分钟，小心将上清转移到一个离心管中。此上清液是去除了mRNA的总RNA。可以-80℃保存作为阴性对照。如果mRNA回收失败也可以再次用于纯化。
  

• 洗涤一次：加入0.5mL结合液，混匀后4℃ 1000g离心5分钟，小心弃上清。
  

• 重复上步的洗涤步骤2-4次。
  

• 在加入50μL RNase-free水，混匀后4℃ 1000g离心5分钟，小心收集上清（mRNA）。
  

• 重复上步1次。
  

• 将各次收集的mRNA混合，即为mRNA溶液。
  

• 按微量核酸沉淀剂的方法沉淀mRNA，具体操作如下：
  

• 按2:1的比例将微量核酸沉淀剂与mRNA溶液混合。
  注意：微量核酸沉淀剂取用前需要摇匀。
  

• 室温15000g离心10分钟。
  

• 弃上清后加自备的75%乙醇1mL，振荡混匀。
  

• 15000g离心5分钟，弃上清。
  

• 再短暂离心后小心吸弃上清，沉淀即为回收的mRNA沉淀，可溶于RNase-free水中直接使用或放-80℃保存。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！