柱式软体RNA提取试剂盒(柱式软体RNAout)
Column Serum/plasma RNAout
产品及特点 本产品是专门用于从血清/血浆等液体样品中提取游离 RNA 的产品,它具有下列特点:
1. 操作简单,整个过程只需要 20 分钟左右,不需要额外在洗柱液中补加乙醇。
2. 灵敏度高,通过 RT-PCR 检测到的最终灵敏度可以达到 50 拷贝/mL。
3. 安全无毒,不需要使用苯酚和氯仿等有机溶液。
4. 与 RT-PCR 和荧光 RT-PCR 兼容。
5. 价廉物美,性价比远低于国外同类产品。
6. 适用于各种材料,包括血清、血浆、脑脊液、尿液、粪便、培养细胞上清
液等无细胞材料。
运输及保存 常温运输,4℃保存,有效期一年。
自备试剂 无
使用方法 1. 在 1.5 mL 离心管中加入 0.1-0.2 mL 血清/血浆样品。如果样品需要富集,可以将 1.5 mL 液体在 4℃下 24,000 g 冷冻离心 60 分钟,移弃1.3mL 后继续操作。
2. 加入 0.6 mL 溶液 A,振荡 30 秒混匀后室温放置 10 分钟。注意:溶液A在4℃放置后可能会产生沉淀,使用前必须放在 65℃水浴使沉淀彻底溶解并充分摇匀后再取用。
3. 将溶液全部转移到离心吸附柱中,室温放置 2 分钟。
4. 12,000-15,000 g 室温离心 1 分钟,弃收集管中穿透液。
5. 加入 0.8 mL 通用洗柱液到离心吸附柱中,12,000-15,000 g 室温离心 1 分钟,弃收集管中穿透液。
6. 12,000-15,000 g 室温离心半分钟。
7. 在离心吸附柱的滤膜的中部加入 30-100 uL 通用洗脱液,然后将离心吸附柱套入一新的 1.5 mL 离心管中,室温放置 2 分钟。
8. 12,000-15,000 g 室温离心 1 分钟,离心管中收集的样品即为 RNA。
9. RNA 样品可以直接用于 RT-PCR 或逆转录反应,也可放-80℃长期保存。
注:游离的 RNA 一般含量极少,不宜用电泳法检测。
疑难解答
Q:提取血清血浆等液体样品/病毒核酸(RNA 或 DNA)为何很难?
A:原因一是量少。病毒颗粒中的 RNA 或 DNA 是作为遗传物质保存,每个病毒最多只携带几个拷贝(而一个细胞中有上万种 RNA 分子,每种 RNA 有很多拷贝),同时其长度也十分有限(一般不到细胞基因组的万分之一),样品中病毒数往往又不是很多,使得样品中病毒核酸的绝对量往往比一个细胞中核酸的绝对量还少,所以操作中十分容易丢失。另外,由于得到的核酸绝对量很少,不能使用电泳和测 OD 检测,只能通过 PCR 或 RT-PCR 检测,而 PCR 或 RT-PCR 的条件又需要优化,所以要确定提取是否成功十分不容易。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
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