DH10Bac热激感受态细胞

DH10Bac热激感受态细胞
DH10Bac Chemically Competent Cell

DH10Bac热激感受态细胞产品规格（CAT#:ZY1071）

DH10Bac：                                                100μl/支

pUC19 (control vector，10pg/μl):                   10μl

保存条件(保质期)：                            -80℃（6个月） 

基因型

F- mcrA ?(mrr-hsdRMS-mcrBC) ?80lacZ?M15 ?lacX74 recA1 endA1 araD139 ?(ara, leu)7697 galU galK λ- rpsL nupG /pMON14272 / pMON7124

DH10Bac热激感受态细胞产品说明

DH10Bac菌株主要用于生产重组杆状病毒分子（Bac-to-Bac杆状病毒表达系统）。该菌株中含有父本杆粒 bMON14272 、辅助质粒 pMON7124 ：父本杆粒 bMON14272包含 mini-F复制子, 卡那抗性基因, attTn7 位点和 lacZα互补因子；辅助质粒 pMON7124 含有 tnsABCD区（tnsABCD region supplies the transposition proteins required for insertion of the mini-Tn7 from the donor plasmid into its target site on the parent bacmid），具有四环素抗性，在细胞扩增过程中丢失，但可提高供体质粒pFastBac（具有庆大霉素抗性）转化后的基因转座效率。mcrA、mcrBC及mrr突变使DH10Bac菌株适合于克隆富含甲基胞嘧啶或甲基腺嘌呤的DNA（Therefore , genomic DNA , both  prokaryotic and eukaryotic, can be cloned efficiently in DH10Bac）。recA1和endA1的突变有利于插入DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取。?80lacZΔM15 的存在使DH10Bac可用于蓝白斑筛选，DH10Bac感受态细胞经特殊工艺制作，pUC19质粒检测转化效率>10⁸cfu/μg DNA。

DH10Bac热激感受态细胞操作方法

1. DH10Bac感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，5分钟后待菌块融化，加入供体质粒（pFastBac等）1ng，并用手拨打EP管底混匀，冰中静置25分钟。

2. 42℃水浴热激45秒，迅速放回冰中并静置2分钟，晃动会降低转化效率。

3. 向离心管中加入900μl不含抗生素的SOC液体培养基，37℃，225 rpm复苏4小时。

4. 复苏完成后，用SOC稀释转化液到（10-1，10-2），每个稀释用吸取100ul铺一个LB平板（共涂3个平板），平板包含50ug/ml Kan，7ug/ml Gentamicin，7ug/ml tetracycline，40ug/ml X-gal，40ug/ml IPTG。

5. 将平板倒置放于37℃培养箱48h（抗生素含量较高，需在37度长时间培养才能挑到合适克隆）。

DH10Bac热激感受态细胞注意事项

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！