PC-12(well-differentiated)细胞
细胞名称:大鼠肾上腺嗜铬细胞(高分化);PC-12
物种:大鼠
规格:T25培养瓶,1×106cells
形态特征:多角
生长特性:贴壁
PC-12(well-differentiated)细胞描述:
PC-12(well-differentiated)细胞该细胞系来自可移植的雄性大鼠的肾上腺嗜铬细胞瘤;表达神经生长因子(NGF)受体,NGF可诱导该细胞产生可逆性的神经表型。该细胞可产生儿茶酚胺、多巴胺和去甲肾上腺素,但不合成肾上腺素。
培养条件:RPMI 1640(Gibco 11875) 10%马血清 5%FBS
传代方法:1:2-1:4传代,消化2-3分钟,2~3天换液1次。
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支原体感染会造成什么后果?
1、改变细胞膜状态
2、改变细胞生长习性
3、破坏细胞染色质
4、改变细胞表型
5、降低转染/转导效率
6、交叉感染其他细胞系
以上所有都会导致实验结果不可靠,重复性低!
PC-12(well-differentiated)细胞准备:
培养PC-12(well-differentiated)细胞之前必须有充足的思想准备,这株细胞非常好养,而且不能偷懒,必须勤快。细胞对氧气、密度和养分非常敏感,稍微偷懒拖一天不换液,可能就会导致细胞全部死亡的后果。只要保持换液和传代频率,多注意细胞密度,这株细胞还是可以征服的!
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PC-12(well-differentiated)细胞培养技巧:
建议平躺着培养该细胞,以增大空气交换面积,且液体高度最好不要超过3mm,一般T25培养瓶加6-8ml培养基,T75培养瓶加15ml左右培养基即可。培养基尽量现配,配好的培养基最好两周内用完,因为叶酸不稳定易分解。
一般情况下细胞2-3天换液一次,即使培养基没有变黄。换液时轻轻侧过培养瓶/皿,不要使细胞飘起来,用巴氏吸管轻轻吸取部分上清弃去,补加等体积的新鲜培养基继续培养。或者将全部培养液转移至离心管中,1000rpm离心5min,吸去上清后用新鲜培养轻轻重悬后重新种瓶,重悬时不可吹打过度。细胞对离心和吹打比较敏感,离心和反复吹打会影响细胞状态,建议只在细胞产生大量碎片时才离心清洗。平常换液建议半换,传代可直接补加足够新鲜的培养基后直接分瓶。
细胞团长至肉眼可见,且T25瓶子有几十上百个小团时,细胞数量已经比较多,此时应该2天换液一次。当一个20倍视野有4-5个大细胞团时应该进行传代。传代时加入两倍体积的新鲜培养基后,轻轻吹打细胞团,将大的细胞团打散成小团,但不要剧烈吹打成单细胞悬液,因为单个的细胞是基本没有增殖活力的细胞,然后将混匀的细胞悬液转移至新的培养瓶中。或者将细胞悬液转移至离心管中,1000rpm离心5min后,弃去上清,加入三倍体积的新鲜培养基轻轻重悬后转移至三个新的培养瓶中。
冻存液用50%血清+40%完全培养基+10%DMSO。细胞数量应在0.5-1.0×106/ml为宜。复苏时可适当加大胎牛血清的含量,以使细胞尽快长起来。复苏后细胞需要重新聚团及较长的潜伏期,故复苏时间较长,期间应多加观察,并注意更换培养基,频率为3天一换(半换)。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
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