生物样品中糖基化分析检测方案

蛋白质糖基化是生命系统非常重要的翻译后修饰之一，在免疫识别、蛋白分泌、信号转导等生命过程中发挥了中医院的作用。与蛋白相连的多聚糖是这些功能的重要载体。特别是对于单克隆抗体药物，多聚糖部分对药物的生物活性有着重要的影响。因此，发展分离效率高，检测灵敏度好的糖基化分析方法对单克隆抗体药物分析具有十分重要的意义。

蛋白质的糖基bai化是指在糖基转移酶du作用下将糖转移至蛋白质zhi，和蛋白质上的氨基dao酸残基形成糖苷键的过程。糖基化是对蛋白的重要的修饰作用，有调节蛋白质功能作用。具体过程：

N-连接的糖链合成起始于内质网，完成与高尔基体。在内质网形成的糖蛋白具有相似的糖链，由Cis面进入高尔基体后，在各膜囊之间的转运过程中，发生了一系列有序的加工和修饰，原来糖链中的大部分甘露糖被切除，但又被多种糖基转移酶依次加上了不同类型的糖分子，形成了结构各异的寡糖链。糖蛋白的空间结构决定了它可以和那一种糖基转移酶结合，发生特定的糖基化修饰。

许多糖蛋白同时具有N-连接的糖链和O-连接的糖链。O-连接的糖基化在高尔基体中进行，通常的一个连接上去的糖单元是N-乙酰半乳糖，连接的部位为Ser、Thr和Hyp的OH基团，然后逐次将糖基转移到上去形成寡糖链，糖的供体同样为核苷糖，如UDP-半乳糖。糖基化的结果使不同的蛋白质打上不同的标记，改变多肽的构象和增加蛋白质的稳定性。

在高尔基体上还可以将一至多个氨基聚糖链通过木糖安装在核心蛋白的丝氨酸残基上，形成蛋白聚糖。这类蛋白有些被分泌到细胞外形成细胞外基质或粘液层，有些锚定在膜上。

 蛋白质糖基化是生命系统非常重要的翻译后修饰之一，在免疫识别、蛋白分泌、信号转导等

生命过程中发挥了中医院的作用。与蛋白相连的多聚糖是这些功能的重要载体。特别是对于单克

隆抗体药物，多聚糖部分对药物的生物活性有着重要的影响。因此，发展分离效率高，检测灵敏

度好的糖基化分析方法对单克隆抗体药物分析具有十分重要的意义。

采用仪器： 

§ 该系统的性能比传统的或优化的HPLC更出色，使色谱系统的工作效率更高， 线性速度、流速、耐压范围更宽。　

§ 作为一款高度稳定，可靠，重现性好的色谱系统，超高效液相色谱系统已经 成功地在全世界各大实验室的各种苛刻分析领域中广泛应用。

§ 系统整体设计的独到之处在于沃特世的亚二微米杂化颗粒技术，与 当今传统的5 μm颗粒填料技术的HPLC系统相比，各方面性能得到了显著 的提高。

ACQUITY UPLC系统既可以单独使用，也可以与沃特世的光学与质谱检测技术配对使用，为各行各业提供完善的终端对终端的解决方案。自从其诞生，ACQUITY UPLC技术已经使分析学家抛开传统HPLC分离局限束缚进行更加深入探索。

优势与特点

§ 使用亚二微米颗粒填料所能得到的柱效：

• 相对5 μm颗粒尺寸柱子可以达到3倍以上的效率

• 分辨率高出5 μm颗粒尺寸柱子70%以上

• 进行梯度分离时，峰容量用于测量分辨能力

§ 在单位时间内分析的样品量更多，得到的信息更丰富：

• 在方法转换过程中，将5 μm颗粒尺寸的色谱柱转换为亚二微米颗粒尺寸的色谱柱，UPLC色谱柱的柱长只需要原色谱柱的三分之一，但是柱子的柱效可以保持不变。

• 可以在3倍以上的线速度流速上进行分离

• 分离效率提高9倍以上，同时不影响分辨率

§ 在检测越来低含量的化合物时，无需改变检测模式：

• 亚二微米颗粒尺寸的ACQUITY UPLC系统将灵敏度提高了70%

• 如果效率相同，但分析时间快了，也就是说，灵敏度比使用 5μm颗粒提高了3倍

• 抛开光学检测器来看质谱，色谱峰的低扩散增强了专属性，有效地提高了离子化效率，使ACQUITY UPLC成为各种规格质谱检测器的理想接口

§ 分辨率提高