pCold-SUMO-10His原核蛋白表达试剂盒
本试剂盒所包含的原核表达载体(pCold-SUMO-10His)是在pCold-SUMO载体基础上改造而成(联迈生物专利),该载体启动子(CS Promoter)来源于南极嗜冷细菌,在低温下(15度)才能启动蛋白的表达。低温下细菌生长缓慢,使得蛋白合成速度减慢,从而大限度的提高了蛋白正确折叠的几率,提高了蛋白可溶性表达,增强了活性蛋白的表达比率。该表达系统所包含的SUMO tag可以极大地提高小分子量蛋白的表达量,而且能进一步提高蛋白的可溶表达几率。另外,TEE信号肽可增强冷启动子调控下目的蛋白的高表达。 升级后的pCold-SUMO-10His载体,其SUMO蛋白标签含有10个组氨酸标签(10His tag),使其结合Ni-NTA的能力更强。与较早版本的pCold-SUMO表达系统相比,pCold-SUMO-10His表达系统在保留了原有系统的蛋白可溶性生产能力、高特异性剪切能力的情况下,显著提高了与Ni-NTA的结合能力。通过与Ni-NTA结合能力的提高,在以下三个方面改善了生产重组蛋白的性能:(1)提高了粗蛋白样品中目标蛋白的捕获能力,从而提高纯化产量;(2)在蛋白纯化过程中可以使用更高浓度的咪唑进行漂洗,去杂蛋白的能力明显提升,从而获得更高纯度的重组蛋白;(3)在重组蛋白酶切去除SUMO标签后,利用Ni-NTA去除SUMO标签更为彻底,获得纯度更高的无标签目标蛋白。 | ||
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组分 | ||
组分名称数量保存pCold-SUMO-10His Vector (200 ng/μl)50 μl-20℃pCold-SUMO-10His-Positive Plasmid (20 ng/μl)20 μlSUMO Protease (10 U/μl)100 μl10×SUMO Buffer1 mlrTEV Protease (10 U/μl)100 μl20×rTEV Buffer1ml1700X氯霉素(34mg/ml)1 ml200X L-阿拉伯糖(100mg/ml)1 ml1000X四环素(2mg/ml)1 mlE.coli Transfer Reagent1.2 mlLyophilized Arctic (DE3) competent cells5支Lyophilized BL21(DE3)Chaprone competent cells5支 | ||
主要特征 | ||
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应用 | ||
包涵体蛋白的佳解决方法,提高蛋白的可溶性优化表达。 | ||
实例 | ||
![]() | Fig1 . M. 中分子量蛋白Marker 1. 未诱导 2. pET15b系统表达全菌体蛋白 3.pET15b系统表达上清液(可溶蛋白部分) 4.pCold-SUMO表达于BL21(DE3)全菌体蛋白 5.pCold-SUMO表达于BL21(DE3)上清液(可溶蛋白部分) 6.pCold-SUMO表达于BL21(DE3)chaprone全菌体蛋白 7.pCold-SUMO表达于BL21(DE3)chaprone上清液(可溶蛋白部分) 8.使用Ni-NTA Resin纯化SUMO融合蛋白 9.切除SUMO tag后的目的蛋白 | |
泳道2和3表明使用pET系统表达几乎无可溶性蛋白表达,皆为包涵体;泳道4和5表明使用pCold-SUMO系统于BL21(DE3)菌中,可溶性蛋白表达约占40%;泳道6和7表明使用BL21(DE3)chaprone可进一步提高蛋白的可溶性表达。 | ||
![]() | Fig2. 分别用2 μl和5 μl的SUMO蛋白酶(C0801)对100 μg pCold-SUMO-10His-Positive Plasmid 表达所得对照蛋白进行酶切1h或3h,如图所示。M:Protein Marker,泳道1:纯化后的含SUMO标签的对照蛋白; 泳道2:2μl SUMO Protease 酶切1h产物;泳道3:5μl SUMO Protease 酶切1h产物; 泳道4:2μl SUMO Protease 酶切3h产物;泳道5:5μl SUMO Protease 酶切3h产物。 |
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企业名称
上海联迈生物工程有限公司
企业信息已认证
企业类型
信用代码
310117003747946
成立日期
2017-09-26
注册资本
100
经营范围
从事生物科技、医疗科技领域内的技术开发、技术咨询、技术服务、技术转让,仪器仪表、机电设备、机械设备、玻璃制品、电子产品、一类医疗器械、化工产品及原料(除危险化学品、监控化学品、烟花爆竹、民用爆炸物品、易制毒化学品)的销售。【依法须经批准的项目,经相关部门批准后方可开展经营活动】
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上海市松江区新车公路185号上海莘莘学子创业园
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