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上海联迈生物工程有限公司
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产品介绍
LAMP-TaqMan检测试剂盒
| LAMP（Loop-mediated isothermal amplification）是一种新型的滚环扩增技术,在恒温条件下，呈指数级别放大核酸分子，30分钟内将DNA放大109~1010倍。其快速、恒温的独特技术优势，使得LAMP技术成为开发诊断试剂的明星潜力技术。由于在LAMP扩增中用到很高浓度的引物，因此难免保证有少量错配和引物Dimer，这些轻微的污染都会导致LAMP高速的扩增中造成假阳性检测。无论采用SYBR Green、浊度、HNB等各种显色方法都很难产生高特异性的信号。因此从公布至今有近20年的时间，其仍然无法在诊断试剂领域获得广泛应用。因此，将类似标准定量PCR中的TaqMan探针技术应用到LAMP检测中，一直是分子生物家追求的目标。至今，虽有多种探针设计方案，但均无法满足准确、可靠、快速的要求。 2019年，联迈生物在开发非洲猪瘟快检试剂的实验过程中，由分子生物学工具酶领域的专家-张森博士领导的研发团队研发出了具有链置换活性和探针切割活性的DNA聚合酶-Bst 5.0，并将该酶成功用于LAMP和TaqMan探针组成的荧光检测系统上。应用该项技术后，在利用LAMP快速、高灵敏度、恒温检测优点的基础上，彻底解决了LAMP技术的假阳性问题。将TaqMan探针应用于LAMP扩增体系后，为LAMP技术更加广泛的应用于临床诊断奠定了坚实的基础。 注：本产品为定制开发型产品，具体信息请来电或邮件咨询。如需订购，我公司负责引物和探针的制备。 | ||
主要特征 | ||
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LAMP TaqMan与TaqMan PCR的原理比较 | ||
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LAMP TaqMan与TaqMan PCR的差异比较 | ||
| TaqMan PCR法LAMP TaqMan法扩增条件95-60℃循环变性、复性扩增60℃恒温滚环扩增引物靶标区域3个特异性区域9个特异性区域信号放大级别倍数级（增加2倍/循环）指数级（增加107倍/min）探针形式双标记切割探针双标记切割探针报告基团荧光基团，通常FAM荧光基团，通常FAM反应时间35~60min15~25min是否可采用粗制核酸全血或溶血样品必须提取核酸所有样品可直接使用所需的设备标准定量PCR仪可以使用标准定量PCR仪 也可以使用便携式恒温荧光仪是否可野外操作否可以敏感度>50 Copy易判读单Copy易判读特异性偶有假阳性无假阳性 | ||
LAMP TaqMan与TaqMan PCR的敏感性和特异性比较 | ||
| 以非洲猪瘟病毒（African swine fever virus，ASFV）外膜蛋白P72为靶基因（GenBank No.:AY578706）为例, 分别应用LAMP-TaqMan和TaqMan qPCR法检测相同模板（标准质粒和病样），对其检测结果进行比较如下。 | ||
| 1、采用标准质粒进行灵敏度测试 | ||
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| 结果显示TaqMan PCR法在100 copy以上是容易判读的，在10 copy以下并不容易判读；而LAMP TaqMan在5 copy的情况下仍然扩增有力，可以清晰判读。这得益于LAMP 107/min的复制能力，从扩增曲线可得知，在起峰后2~3min内，信号即可达到平台期，而且总体反应时间<20min，15min即可判读结果。 | ||
| 2、采用制备的病料DNA基因组进行灵敏度测试 | ||
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| 将病料基因组DNA做梯度稀释进行测试，结果显示TaqMan PCR法在pg级（25~50 copy）以上是容易判读；而LAMP TaqMan在fg水平的情况下仍然可以清晰判读。从结果来看128fg的基因组DNA中含有单copy的病毒分子。 | ||
| 3、对低浓度模板的检测稳定性比较 | ||
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| 结果显示TaqMan PCR法在5到10 copy的模板量条件下（8重复实验），判读较困难。而LAMP TaqMan在2 copy模板的条件下仍然清晰且稳定地判读（8重复实验）。 | ||
| 4、LAMP TaqMan在便携式恒温荧光检测仪上的表现 | ||
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| 结果显示：在小型便携式恒温荧光检测仪上，LAMP TaqMan同样表现出色。其表现出来的敏感性、特异性、稳定性、结果的可靠性，远远超出任何其它恒温检测技术。 | ||
| 5、LAMP TaqMan对于低病毒含量粗制样品的检测较TaqMan qPCR效果更佳 | ||
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| 结果显示：对于病毒含量极低的样品采用粗制品检测，LAMP-TaqMan方法检测的4个样品扩增有力，结果更加清晰可判，因此LAMP-TaqMan方法完全符合低病毒含量样本粗制品的检测要求。 | ||
LAMP TaqMan试剂形式 | ||
| 由于LAMP TaqMan引物和探针组合的设计工作仍然有相当的难度和不确定性，目前联迈生物提供的仅为开发和委托生产形式，销售和开发版权归属委托单位（但必须获得联迈生物的技术授权）。在不久的将来，联迈生物将推出设计软件，并将所有诊断试剂开发流程开放。目前联迈生物提供的为冻干全试剂状态，冻干品包含Bst 5.0 DNA聚合酶、引物探针、dNTP和保护剂等，复溶后（为1x浓度）直接使用，提供50T/瓶和单支装两种形式。 | ||
| （1）生产容易，批次稳定，保存、运输稳定，造价低。（2）所有机器通用，根据设备需要用户自备反应管或板。（3）复溶后试剂需要-20℃保存，且短期内用完。（4）适合检测样品量较大的单位使用。（1）生产难度大、次品率高、成本高、成品保质期低于瓶装试剂。（2）目前仅提供透明0.2ml EP管，不适用于BioRad、Roche等定量PCR机型。（3）使用方便，不受样品数限制。加入20μl溶解液后，再加入1μl模板即可上机反应。（4）适合样品量较少、或练习等试验。适合恒温荧光检测仪，野外检测用。 | ||
LAMP-TaqMan检测试剂盒信息由上海联迈生物工程有限公司为您提供，如您想了解更多关于LAMP-TaqMan检测试剂盒报价、型号、参数等信息，欢迎来电或留言咨询。除供应LAMP-TaqMan检测试剂盒外，上海联迈生物工程有限公司还可为您提供骨桥蛋白/分泌型磷蛋白1抗体、胰岛素降解酶抗体、甘丙肽/神经节肽抗体等产品，公司有专业的客户服务团队，是您值得信赖的合作伙伴。
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工商信息
企业名称
上海联迈生物工程有限公司
企业信息已认证
企业类型
信用代码
310117003747946
成立日期
2017-09-26
注册资本
100
经营范围
从事生物科技、医疗科技领域内的技术开发、技术咨询、技术服务、技术转让,仪器仪表、机电设备、机械设备、玻璃制品、电子产品、一类医疗器械、化工产品及原料(除危险化学品、监控化学品、烟花爆竹、民用爆炸物品、易制毒化学品)的销售。【依法须经批准的项目,经相关部门批准后方可开展经营活动】
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