诃子染料法PCR鉴定试剂盒
Fructus chebulae
规格:50次
产品及特点
聚合酶链式反应(PCR)是体外酶促合成特异DNA片段的一种方法,由高温变性、低温退火(复性)及适温延伸等几步反应组成一个周期,循环进行,使目的DNA得以迅速扩增,具有特异性强、灵敏度高、操作简便、省时等特点。 特异性强 PCR反应的特异性决定因素为: ①引物与模板DNA特异正确的结合...”它具有下列特点:
1. 即开即用,用户只需要提供 DNA 模板。
2. 引物经过精心优化,专一性强,只扩增诃子染料法,与其他植物没有交叉反应。
3. 提供阳性对照,便于区分假阴性样品。
4. PCR mix 中含上样染料,PCR 后可以直接上样电泳。
5. 本试剂盒足够做 40μL 体系的 PCR 50 次,但只能用于科研。
![图片18.png 图片18.png](https://img1.17img.cn/17img/images/201912/uepic/278bf3f9-ece8-4260-aad4-35726d0bd22a.jpg)
规格及成分
成分 | 编号 | 十孔盒包装 |
PCR MagicMix 3.0 | 1 | 1 mL(红盖) |
超纯水 | 2 | 1 mL(亮黄色) |
诃子染料法 PCR 引物混合液 | 3 | 100 μL(白盖) |
诃子染料法 PCR 阳性对照 (1×10E8 拷贝/μL) | 4 | 50 μL(黄盖) |
核酸释放剂(试用装) | 5 | 20 次(1 mL,绿盖) |
使用手册 | 6 | 1 份 |
运输及保存:低温运输,-20℃保存,保存期限为一年。阳性对照需要单独放置,不要污染其他试剂。
自备试剂:样品 DNA。
使用方法:
一、样品 DNA 的制备
1. 用自选方法纯化 N+2 个样品的 DNA,本试剂盒跟市场上大多数核酸提取试剂盒兼容。本试剂盒免费赠送20 次核酸释放剂试用装,其使用手册可以从本公司网站订购核酸释放剂。
2. 如果有 N 个样品,则需要做 N+2 个提取,包括一个样品制备阳性对照和一个样品制备阴性对照。样品制备阳性对照是在适量水(取决于试剂盒要求的样品起始量)中加 10μL 诃子染料法 PCR 阳性对照的 1000 倍稀释液而得,样品制备阴性对照是直接用水。提取结束后后得到模板 DNA 放冰上待用。
二、设置 PCR 反应(40μL 体系)
3. 对 N+2 个样品,在 PCR 时需要增加一个 PCR 阳性对照和一个 PCR 阴性对照,故需要设置 N+4 个反应。在 N+4 个 PCR 管中分别加入下列成分:
成分 | N+2 个样品管 | PCR 阴性对照 | PCR 阳性对照 |
PCR MagicMix 3.0 | 各 20 μL | 20 μL | 20 μL |
诃子染料法PCR引物混合液 | 各 2 μL | 2 μL | 2 μL |
N+2 个样品 DNA 模板 | 各 18 μL | -- | -- |
PCR 阴性对照(水) | -- | 18 μL | -- |
PCR 阳性对照(诃子染料法 PCR 阳性对照的 1000 倍稀释液) | -- | -- | 18 μL |
4. 按下表设置 PCR 反应:
过程 | 温度 | 时间 |
预变性 | 95℃ | 5 min |
PCR 反应(35 个循环) | 95℃ | 15 sec |
57℃ | 15 sec |
72℃ | 40 sec |
后延伸 | 72℃ | 10 min |
三、电泳检测
5. 取 10-20 μL PCR 产物。电泳检测 PCR 产物。本产品提供的 PCR Mix在扩增结束后可以直接上样,不需要另外再加 loading buffer。PCR 产物阳性对照必须有预期条带出现,阴性对照必须无任何扩增,否则实验无效。对没有扩增产物的样品,可以稀释 10 倍后重复 PCR 扩增以排除 PCR 抑制剂的感染。
中药鉴定学
中药鉴定学主要是对中药的质量和品种进行鉴定和研究,制定出中药质量鉴定标准,寻找新的药源。中药鉴定的五大方法:性状鉴定法、基原鉴定法、生物鉴定法、理化鉴定法、显微鉴定法。
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