HS™ Mix

HS™ Mix

规格价格：1 ml（40次，50 μl体系/次）156元  

规格价格：1 ml*5（200次，50 μl体系/次）650元 

产品简介

 HS™ Mix是2×浓缩的快速高效PCR预混合溶液，含有HS™ Taq DNA聚合酶、dNTPs、缓冲液等PCR扩增必需组分（模板与引物除外）。使用时，仅需在扩增体系中加入模板和引物即可进行PCR，大大简化操作过程，缩短操作时间，降低污染（加样次数减少）。HS™ Mix的反应体系经特殊优化，减少引物二聚体的形成，显著提高PCR扩增的特异性。同时，由于体系内含有增强剂，能够显著增强PCR扩增的灵敏度。

HS™ Taq DNA聚合酶（高特异性Taq DNA聚合酶）是针对普通 Taq DNA聚合酶灵敏度高，易产生非特异性条带的情况，专门研制的高特异性嗜热DNA聚合酶产品。本产品的反应缓冲液的离子种类和浓度都经过改良，使得引物与模板的特异性结合力显著增强，从而提高引物与模板结合的严谨性，减少非特异性扩增。实验数据证明HS™ Taq DNA聚合酶能显著提高PCR扩增的特异性，降低背景，又能对长片段有较高的扩增效率。延伸速度为1min/kb（70~75℃，简单模板可达10s/kb）。该酶具有5'→3'聚合酶活性，无3'→5'外切酶活性。扩增产物具有3'-dA，可直接用于TA克隆。

产品组成

本产品分含体系中包含溴酚蓝、不含溴酚蓝两类。体系中包含溴酚蓝的产品，PCR扩增产物可直接电泳检测。这两类产品的扩增性能无差异。如无特别说明提供体系中包含溴酚蓝的包装。

保存条件

-20℃保存2年。

质量控制

纯度检测：经质量检测，产品不含脱氧核糖核酸内切酶、脱氧核糖核酸外切酶和核糖核酸酶污染。

功能检测：PCR方法检测无宿主残余DNA，能有效扩增人基因组中的单拷贝基因。

应用举例

1. 配制反应体系

请于冰上配置反应体系，体系大小与组分用量与添加顺序可调整：

[1] 引物终浓度建议范围：0.1-1 μM。特异性差时可降低浓度，效率低时可提高浓度。

[2] 不同模板最佳用量不同，部分DNA模板建议用量如下表（50 μl反应体系）。

[3] 可单独订购超纯水。

[4] 可单独订购25mM MgCl₂和PCR Enhancer。

2. 设定反应程序进行PCR反应

[1] 退火温度应根据Tm值较低的引物来设。

[2] 延伸时间按1min/kb来设最佳（简单模板可达10s/kb）。

3. 分析结果

反应产物可直接进行琼脂糖凝胶电泳，通过凝胶成像设备观察目的条带的扩增情况。如有需要，可进行割胶回收。

无产物或产物量少的改进措施有：1调整退火温度；2减少抑制剂的影响，如提取的基因组DNA中含有抑制扩增的成分，需要高倍稀释（1:；10000）后使用；3采用乙醇沉降洗脱，提高模板DNA的纯度；4使用PCR添加剂，如PCR Enhancer、MgCl₂等可提高产量。

操作注意事项

1 室温下HS™ Taq DNA聚合酶有一定的活性，为避免发生非特异性扩增，请于冰上配置反应体系，并且最后添加模板DNA。

2 HS™ DNA聚合酶具有脱氧核苷酸转移酶活性，因此在PCR产物3'末端通常会加上1个多余的脱氧腺嘌呤核苷，可直接用于TA克隆。也可以使用HS™ Mix进行加A反应。

3 碱基错误率是指在每个碱基合成过程中所掺入的错误核苷酸数目。HS™ Taq DNA聚合酶的碱基错误率为1×10^-5。

引物设计注意事项

引物长度一般在15-30个碱基之间；上下游引物3末端避免互补，避免出现3个以上重复的G或C，或出现发夹结构，否则会产生非特异性扩增；GC含量控制在40-60%，且上下游引物GC含量尽量接近；Tm值控制在55-65℃之间，且上下游引物Tm值尽量接近，额外附加序列（酶切位点、修饰等）是非模板匹配序列，不参与Tm值计算。