一站式SDS-PAGE蛋白电泳套装

一站式SDS-PAGE蛋白电泳套装

产品及特点SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)是目前电泳法变性分离蛋白质的主 要方法，但是单独配制各种溶液十分繁琐，为此基因开发了本产品。它具 有下列特点:

1. 一站式，即开即用，用户不需单独准备各种成分，十分方便。

2. 安全，将实验人员接触粉末状丙烯酰胺的可能降到低。

3. 灵活，分开提供的丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺便于配制各种比例和浓度 的 SDS-PAGE，满足分离各种大小不同的蛋白质的要求。
 规格及成分 成 份 编 号 大纸盒包装保存温度
丙烯酰胺/甲叉双丙烯酰胺
干粉(19:1)分子80810a250mL 棕色玻璃（60 g/3g）RT
分离胶缓冲液，4× 分子100868 200 mL RT
浓缩胶缓冲液，4×（含染料） 分子100867 100 mL RT
TEMED 100880 1.5 mL 4℃
过硫酸铵（干粉） 100879 1 g RT
SDS-PAGE 上样液，5× 81204 1 套（1 mL） -20℃
SDS-PAGE 电泳液（干粉） 81203 1 套（20 L） RT
使用手册 80810sc 1 份 RT

运输及保存 常温运输和保存，但TEMED和5×SDS-PAGE上样液需低温运输，分别在4℃ 和-20℃有效期一年。 自备试剂 去离子水 

使用方法

1. 一次使用本产品时需先配制 30%丙烯酰胺-甲叉双丙烯酰胺（19:1）溶液(30% AB 溶液，下同):在本产品提供的装有 60 克丙烯酰胺/3g 甲叉双丙烯酰胺干粉的瓶中加入 146 mL 自备的去离子水，充分摇晃 10-20 分

钟即得 200 mL 30%丙烯酰胺/甲叉双丙烯酰胺（19:1）溶液（以下简称30%AB 溶液）。丙烯酰胺与甲叉双丙烯酰胺比例在 19:1 时，PAGE 胶的孔径最小，分辨率高。配好的 30%ＡＢ溶液好 4℃避光保存并在１月

内用完。

2. 根据平板的面积和胶的厚度估计需要配制的浓缩胶和分离胶的体积。并根据要分离的蛋白质的大小确定选择浓缩胶和分离胶的浓度，参考下表：蛋白质大小范围（kD） 佳浓缩胶浓度 佳分离胶浓度

15-45 4% 15%

15-60 4% 12.5%

18-75 4% 10%

30-120 4% 7.5%

60-200 不需要 5%

注：如果上样体积少于 10uL，可以不需要浓缩胶。

3. 配制 10%的 APS（过硫酸铵）：称 0.1 克过 APS 干粉到 1 mL 去离子水中，摇晃溶解。配制好的 10%的 APS 溶液可以在 4℃存放一周。4. 配制分离胶：在一个 25 mL 的三角瓶中，先按下表的用量加入水、30%的 AB 溶液和 4×分离胶缓冲液。以下是配制 10 mL 胶的用量，更大体积则各成分用量需按比例增加。丙烯酰胺溶液有神经毒性，一定要戴手套操

作。

分离胶

浓度

用量（单位：mL）

水 30%AB 溶液 4×分离胶配胶液

5% 5.83 1.67 2.50

6% 5.50 2.00 2.50

7% 5.17 2.33 2.50

7.5% 5.00 2.50 2.50

8% 4.83 2.67 2.50

9% 4.50 3.00 2.50

10% 4.17 3.33 2.50

11% 3.83 3.67 2.50

12% 3.50 4.00 2.50

13% 3.17 4.33 2.50

14% 2.83 4.67 2.50

15% 2.50 5.00 2.50

16% 2.17 5.33 2.50

5. 配制浓缩胶（一般使用 4%的浓度）：在一个 25 mL 的三角瓶中，先按下表的用量加入水、30%ＡＢ溶液和 4×浓缩胶缓冲液。以下是配制 10 mL

４％浓缩胶的用量，丙烯酰胺溶液具有神经毒性，一定要戴手套操作。

浓缩胶

浓度

用量（单位：mL）

水 30%AB 溶液

4×浓缩胶缓冲液

（含蓝色染料）

4% 6.17 1.33 2.50

6. 将分离胶和浓缩胶溶液摇晃混匀，抽真空 10-15 分钟以去除溶液中的氧气（氧气能抑制丙烯酰胺聚合反应，不去除将影响丙烯酰胺聚合反应）。

7. 分别加入 50 uL 10%APS 和 30-50 uL TEMED（这是配制 10 mL 分离胶和浓缩胶的用量，更大体积的胶则用量需按比例增加），迅速摇匀。

8. 先灌分离胶，在胶的液面距离顶部 1.5 cm 的时候，停止灌胶。

9. 由于分离胶比重较大，可以立即在上面灌浓缩胶，但灌注时必须小心，不要破坏分离胶和浓缩胶的液面，在浓缩胶液面达到顶部时停止灌胶，插入梳子，室温聚合 30-60 分钟。如果不能做到小心灌浓缩胶，则必须待分离胶室温聚合 30-60 分钟后再灌制。

10. 拔出梳子，用 1×SDS-PAGE 电泳液冲洗加样孔。

11. 将凝胶板固定在电泳装置上，往上槽和下槽加入足够的 1×SDS-PAGE 电泳液。本产品提供 20 升的 SDS-PAGE 电泳液干粉，将所有干粉溶解在 2L 水中即得 10×SDS-PAGE 电泳液（测 pH 应该在 8.3，如果不是 8.3请用 NaOH 或 HCl 调到 8.3），用时再稀释成 1×工作液。

12. 在蛋白质样品中加入5×SDS-PAGE上样液（4uL样品中加1uL上样液），100℃煮沸 3-5 分钟。短暂离心，取上清上样。

13. 先用 10 mA 的电流电泳（对 0.75 mm 厚×14 cm×14 cm 的胶）直到染料进入从浓缩胶进入分离胶。

14. 将电流增加到 15 mA，直到染料进入分离胶底部时终止电泳，取出凝胶进行后续的实验处理。

4. 使用改良的浓缩胶缓冲液，由于其含有染料，制备的浓缩胶呈蓝色，便 于上样时识别加样孔。

5. 电泳后可直接用于考染、银染、Western 杂交等实验