RIPA裂解液(弱强度)
产品及特点RIPA(Radio Immunoprecipitation Assay)裂解液是一种传统的细胞组织快速裂解液。RIPA 裂解液裂解得到的蛋白样品可以用于常规的 Western、IP 等实验。本产品裂解能力强度温和,对膜蛋白的处理能力一般;对核蛋白的提取能力较好;对胞浆蛋白、胞浆磷酸化蛋白和各种转录因子处理效果很好。本产品含有各种蛋白酶和磷酸蛋白酶抑制剂,能有效防止各种蛋白酶对目的蛋白的降解。我公司各种 RIPA 裂解液产品特点见下表:
产品名称RIPA 裂解液(强)RIPA 裂解液(中)RIPA 裂解液(弱)
有效裂解成分
1% Triton
X-100, 1%
deoxycholate,
0.1% SDS
1% NP-40,
0.5%
deoxycholate,
0.1% SDS
1% NP-40,
0.25%
deoxycholate
裂解强度 强 中 温和
对膜蛋白的提取 很好 较好 一般
对胞浆蛋白的提取 很好 很好 很好
对核蛋白的提取 很好 较好 较好
胞浆磷酸化蛋白提取 很好 很好 很好
细胞核转录因子提取 很好 很好 很好
含蛋白酶抑制剂 是 是 是
含磷酸酯酶抑制剂 是 是 是
主要用途 WB, IP WB, IP WB, IP, co-IP
规格及成分 成 份 100 mL 包装
本产品 100 mL
使用手册 1 份
运输及保存 常温运输和保存,有效期一年。
自备试剂 PMSF
![QQ图片20191121152700.png QQ图片20191121152700.png](https://img1.17img.cn/17img/images/201911/uepic/6fb646fa-010f-459f-8b5f-b352f7bf1a9f.jpg)
使用方法 对于培养细胞样品:
1. 融解 RIPA 裂解液,混匀。取适当量的裂解液,在使用前数分钟内加入 PMSF,
使 PMSF 的最终浓度为 1mM。
2. 裂解细胞
2.1 对于贴壁细胞:去除培养液,用 PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血
清中的蛋白没有干扰,可以不洗)。按照 6 孔板每孔加入 150-250 微升裂解液的比
例加入裂解液。用枪吹打数下,使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞 1-2
秒后,细胞就会被裂解。
2.2 对于悬浮细胞:离心收集细胞,用手指把细胞用力弹散。按照 6 孔板每孔细胞加入 150-250 微升裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多,必需分装成 50-100 万细胞/管,然后再裂解。
3. 充分裂解后,10000-14000g 离心 3-5 分钟,取上清,即可进行后续的 PAGE、Western 和免疫沉淀等操作。
注意:通常 6 孔板每孔细胞加入 150 微升裂解液已经足够,但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到 200 微升或 250 微升。
对于组织样品:
1. 把组织剪切成细小的碎片。
2. 融解 RIPA 裂解液,混匀。取适当量的裂解液,在使用前数分钟内加入 PMSF,使 PMSF 的最终浓度为 1mM。
3. 按照每 20 毫克组织加入 150-250 微升裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液,如果需要高浓度的蛋白样品,可以适当减少裂解液的用量。)
4. 用玻璃匀浆器匀浆,直至充分裂解。
5. 充分裂解后,10000-14000g 离心 3-5 分钟,取上清,即可进行后续的 PAGE、Western 和免疫沉淀等操作。
6. 如果组织样品本身非常细小,可以适当剪切后直接加入裂解液裂解,通过强烈vortex 使样品裂解充分。然后同样离心取上清,用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便,不必使用匀浆器,缺点是不如使用匀浆器那样裂解得比较充分。
注:RIPA 裂解液的裂解产物中经常会出现一小团透明胶状物,属正常现象。该透明胶状物为含有基因组 DNA 等的复合物。在不检测和基因组 DNA 结合特别紧密的蛋白的情况下,可以直接离心取上清用于后续实验;如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白,则可以通过超声处理打碎打散该透明胶状物,随后离心取上清用于后续实验。如果检测一些常见的转录因子,例如 NF-kappaB、p53 等时,通常不必进行超声处理,就可以检测到这些转录因子。
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