大肠杆菌Stbl3化学感受态细胞

大肠杆菌Stbl3化学感受态细胞

产品及特点本产品是衍生自大肠杆菌 HB101 菌株，经特殊工艺处理得到的感受态细胞。特别适 用于克隆不稳定载体片段，如含有同向重复序列的慢病毒 DNA 和其他反转录病毒载体。使 用 pUC19 质粒检测，本产品转化效率可达 108。本产品具有下列特点：

1. 此菌株具有链霉素抗性，不存在 lacIqZΔM15，不可用于蓝、白斑筛选。

2. 本产品是复制慢病毒载体系统推荐使用的菌株，对慢病毒载体等较大的质粒转化的效 果好，能够有效抑制长片段末端重复区的重组，减低错误重组的可能性。

3. 非常稳定，能提高慢病毒载体或其他不稳定载体的克隆效率。

4. 菌株基因型为：F – mcrB mrr hsdS20(rB –, mB –) recA13 supE44 ara-14 galK2 lacY1 proA2 rpsL20(StrR ) xyl-5 λ – leu mtl-1 endA1+
规格及成分 成分 编号 十孔盒包装
大肠杆菌 Stbl3 化学感受态细胞 121112 0.1 mL×10
使用手册 121112sc 1 份

运输及保存 干冰运输、-80℃保存，有效期半年。

自备试剂 目的 DNA、SOC 或 LB 培养基等

使用方法

1. 取感受态细胞置于冰浴中（或放手心或室温片刻，待菌体处于冰水混合状态时迅速插 入冰中）。一次转化感受态细胞的建议用量为 50-100 μL，可以根据实际情况分装 使用。 以下实验以 50 μL 感受态细胞为例。

2. 待感受态细胞融化后，向感受态细胞悬液中加入目的 DNA（根据实际情况加入适量 的 DNA，质粒或连接产物），用手拨打 EP 管底或用移液器轻轻吹打混匀，冰上静置 25 分钟。

3. 42℃水浴热击 45 秒，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置 2-3 分钟，晃动会降低 转化效率

。 4. 每个离心管中加入 450 μL 无菌的 SOC 或 LB 培养基（不含抗生素）。

5. 30℃，225 rpm 复苏 90 分钟。（当质粒中含有不稳定片段时， 30℃培养可降低错误 重组的概率，若转化 control PUC19 计算转化效率，则需 37℃，225 rpm 复苏 60 分钟。）

6. 5000 rpm 离心 1 分钟收菌，留取 100 μL 左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相 应抗生素的 SOC 或 LB 培养基上。

7. 平板倒置放于 30℃培养箱过夜培养。（若转化 control PUC19 计算转化效率，则需 37℃培养过夜）

注意：

1. 涂布用量可根据具体实验调整。若转化的 DNA 总量较多，可取少量转化产物涂布平板； 若转化的 DNA 总量较少，可取 200-300 μL 转化产物涂布平板。若预计的克隆数较 少，可通过离心（5,000 rpm，1 分钟）后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于 平板中。

2. 新制备的固体培养基不易涂干，可将平板正置于 30℃直至液体被吸收后再倒置培养。

3. 涂布剩余的菌液可置于 4℃保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下的菌液再 涂布新培养基进行培养。