单细胞悬浮液

单细胞悬浮液

产品及特点 单细胞裂解液（DNA 专用）是单细胞 DNA 提取专用裂解液，产品经过多次优化，含有多种去污剂、变性剂和盐，可有效抑制核酸酶在裂解过程中对核酸的破坏，维持核酸的稳定性。单细胞裂解物可以直接用于全基因组扩增和 PCR 等试验。本产品足够使用 200 次以上。

胚胎裂解液用于将卵裂球（blastomere，含 2-8 个细胞）分离成单个胚胎的溶液，得到的单个细胞如果用于 DNA 分析（如全基因组扩增或 PCR），则可直接用于单细胞裂解（DNA 型）裂解，如果用于 RNA 分析（如 RT-PCR），则可直接用于单细胞裂解（RNA 型）裂解。本产品不能用于胚囊（blastocyst，含 70-100个细胞）。
规格及成分 单细胞裂解液（DNA 型）成分表：
成 份 编 号 1 mL 塑料袋包装
溶液 A 130803A 0.5 mL
溶液 B 130803B 0.5 mL
使用手册 1 份
胚胎裂解液成分表
成 份 编 号 1 mL 塑料袋包装
胚胎裂解液 130806 1 mL
使用手册 1 份
运输及保存 低温运输，4℃保存，有效期一年。

自备试剂 PBS

使用方法如何制备单个细胞取决于实验样品和实验者所拥有的仪器设备，此处所列步骤 仅针对培养细胞、实体组织、淋巴细胞和卵裂球（2-8 细胞胚胎）等材料，对其他 材料（如干细胞克隆、胚囊、胚胎组织等），用户需自行选用合适的方法制备单细 胞。对已经处于单细胞悬浮状态的细胞（如 FACS 分离细胞、卵细胞等），则可以 跳过制备过程而直接进入单细胞裂解步骤：

一、准备单细胞裂解工作液

1. 裂解一个细胞需要 2.5uL 裂解液工作液。根据所要裂解的细胞数准备足够的 裂解液工作液。工作液的制备方法是将等体积的溶液 A 和溶液 B 混合即得。

2. 在每个 200uL PCR 管中加入 2.5 uL 新鲜制备的单细胞裂解液工作液，放置 在冰上待用。

二、用培养细胞或实体组织制备单细

3. 按常规胰酶方法处理培养细胞或组织，将细胞重悬于自备的液体细胞培养基 中。 4. 按常规方法对细胞进行计数。

5. 转移 100-4000 个细胞到新离心管中，400g 离心 4 分钟沉淀细胞，小心弃 上清（培养基）。

6. 将细胞沉淀重悬于 50uL 自备的 PBS 中，使其终浓度为 2-80 个细胞/uL。

7. 在干净培养皿上点加数个 5uL PBS 小液滴，加入 5 uL 细胞悬浮液到一个 小液滴中，然后再从一个小液滴中转移 5uL 到第二个小液滴，如此系列稀 释样品数次，使得其浓度接近每 2.5uL 液体中含 1 个细胞，放冰上待用。

二、用卵裂球（blastomere，2-8 细胞胚胎）制备单个细胞：

8. 在培养皿中点数个含 5uL 胚胎裂解液（CAT#:130806）的小液滴。

9. 显微镜下用微量注射液加入一个卵裂球到一个胚胎裂解液小液滴中。

10. 转移几次到后面的几个液滴中以便将带入的培养基稀释掉。

11. 在最有一个液滴中，卵裂球的几个细胞将彼此分开成单个细胞。

12. 取单个细胞，转移到数个含 5uL PBS 的小液滴中洗涤掉胚胎裂解液。

13. 在显微镜下用显微注射仪取只含一个细胞的 2.5 uL 样品并转移到一个 200uL 的 PCR 管中待用。同时设置无样品的阴性对照（2.5 uL 样品中不含 细胞）。

三：用单细胞裂解液裂解细胞

14. 在显微镜下用显微注射仪取 2.5 uL 样品，确认含一个细胞后，将其转移到一 个含 2.5 uL 单细胞裂解液的 PCR 管中。好同时设置无样品的阴性对照（2.5 uL 样品中不含细胞）。在 2.5uL 样品中，

15. 显微镜下细胞悬液可直接用于单细胞裂解反应。

16. 裂解后可以放冰上待用，如果长期不用，可以放-80℃保存。一般-80℃放置 过 30 分钟到一周时间的样品 PCR 扩增效果好。

四：单细胞裂解物的 PCR 扩增

17. 细胞裂解物从-80℃中取出后，先在 65℃中保温 10 分钟，然后在放冰上放置 待用。

18. 以上步得到的细胞裂解物为模板。按常规方法进行 PCR。