单细胞裂解液（RNA实验用）

单细胞裂解液（RNA实验用）

产品及特点 单细胞裂解液（RNA 专用）是单细胞 RNA 提取专用裂解液，产品经过多次 优化，含有多种去污剂、变性剂和盐，可有效抑制核酸酶在裂解过程中对核酸的 破坏，维持核酸的稳定性。单细胞裂解物可以直接用于测序和 RT-PCR 等试验。 本产品足够使用 200 次以上。 胚胎裂解液用于将卵裂球（blastomere，含 2-8 个细胞）分离成单个胚胎的 溶液，得到的单个细胞如果用于 DNA 分析（如全基因组扩增或 PCR），则可直接 用于单细胞裂解液（DNA 型）裂解；如果用于 RNA 分析（如 RT-PCR），则可直 接用于单细胞裂解液（RNA 型）裂解。本产品不能用于胚囊（blastocyst，含 70-100 个细胞）。
规格及成分 单细胞裂解液（RNA 型）成分表：
成 份 编 号 热封袋包装
单细胞裂解液（RNA 型） 130804 1 mL
使用手册 130804sc 1 份
胚胎裂解液成分表：
成 份 编 号 热封袋包装
胚胎裂解液 130806 1 mL
使用手册 130806sc 1 份

运输及保存 低温运输，=20℃保存，有效期一年。

自备试剂 PBS 溶液

使用方法如何制备单个细胞取决于实验样品和实验者所拥有的仪器设备，此处所列步 骤仅针对培养细胞、实体组织、淋巴细胞和卵裂球（2-8 细胞胚胎）等材料，对其 他材料（如干细胞克隆、胚囊、胚胎组织等），用户需自行选用合适的方法制备单 细胞。对已经处于单细胞悬浮状态的细胞（如 FACS 分离细胞、卵细胞等），则可 以跳过制备过程而直接进入单细胞裂解步骤： 

一、用培养细胞或实体组织制备单

1. 按常规胰酶方法处理培养细胞或组织，将细胞重悬于自备的液体细胞培养基 中

2. 按常规方法对细胞进行计数。

3. 转移 100-4000 个细胞到新离心管中，400 g 离心 4 分钟沉淀细胞，小心弃 上清（培养基）。

4. 将细胞沉淀重悬于 50 uL 自备的 PBS 溶液中，使其终浓度为 2-80 个细胞 /uL。

5. 在干净的培养皿上点加数个含 5 uL PBS 溶液的小液滴，加入 5 uL 细胞悬浮 液到一个小液滴中，然后再从一个小液滴中转移 5 uL 到第二个小液滴， 如此系列稀释样品数次，使得其浓度接近每 2.5 uL 液体中含 1 个细胞，放冰 上待用。 

二、用卵裂球（blastomere，2-8 细胞胚胎）制备单个细胞：

6. 在培养皿中点数个含 5 uL 胚胎裂解液（CAT#:130806）的小液滴。

7. 显微镜下用微量注射液加入一个卵裂球到一个胚胎裂解液小液滴中。

8. 转移几次到后面的几个液滴中以便将带入的培养基稀释掉。

9. 在后一个液滴中，卵裂球的几个细胞将彼此分开成单个细胞。

10. 取单个细胞，转移到数个含 5 uL PBS 溶液的小液滴中洗涤掉胚胎裂解液。

11. 在显微镜下用显微注射仪取只含一个细胞的 2.5 uL 样品并转移到一个 200 uL 的 PCR 管中待用。同时设置无样品的阴性对照（2.5 uL 样品中不含细胞）。

三、用单细胞裂解液裂解细

12. 在显微镜下用显微注射仪取 2.5 uL 样品，确认含一个细胞后，将其转移到一 个含 2.5 uL 单细胞裂解液的 PCR 管中。好同时设置无样品的阴性对照（2.5 uL 样品中不含细胞）。

13. 在 2.5 uL 样品中，显微镜下细胞悬液可直接用于单细胞裂解反应。

14. 裂解后可以放冰上待用，如果长期不用，可以放-80℃保存。

四、单细胞裂解物的 RT-PCR 扩增 

15. 细胞裂解物从-80℃中取出后，放冰上融化待用。

16. 以上步操作得到的细胞裂解物为模板，按常规方法进行 RT-PCR 反应。