一步式RT-PCR Mix

一步式RT-PCR Mix

产品及特点本产品是高效 cDNA 合成和 PCR 扩增的一步法 RT-PCR 试剂盒，于以RNA 为模板，通过特异引物合成 cDNA 之后，在 DNA 聚合酶的作用下通过 PCR技术检测目标基因的含量。本产品特点如下：

1. 实现一管式完成 RT-PCR 反应，避免样品交叉污染。

2. 反应产物加入 Loading Buffer 后可以直接电泳检测。

3. 本产品包含了 cDNA 合成以及 PCR 反应所必须的酶和反应体系，优化的Buffer 体系最大程度的减少了反转录酶对扩增反应的抑制，提高了反应整体的敏感性。

4. 本试剂盒足够 50 次 20μL 体系的 RT-PCR，只能用于科研目的。
规格及成分 成 份 编 号 十孔盒包装
一步式 RT-PCR Mix，5× 130609a 75 μL
RT Buffer，5 × 130609b 200 μL
DEPC-ddH2O 80403-1 1 mL
使用手册 130609sc 1 份

运输及保存 低温运输，-20℃保存，有效期一年。 

自备试剂 1. RNA 模板

2. 自备引物。

使用方法 一、样品 RNA 的制备

1. 用自选方法纯化样品的 RNA，本试剂盒跟市场上大多数 RNA 提取试剂盒兼容。也可以选购本公司的 RNAout 系列产品。

二、设置一管式 RT-PCR 反应（20 μL 体系）

2. 在 N+1 个干净的无 RNase 的 PCR 管中（N=样品数，另外一个是阴性对照。用户可以设置其他对照，样品数需相应增加），按下表加入各成分：成分 阴性对照管 样品管

RNA 模板（自备） 无 1-2 μg

上游引物（10 μM） 0.5 μL 0.5 μL

下游引物（10 μM） 0.5 μL 0.5 μL

RT Buffer，5 × 4 μL 4 μL 一步式 RT-PCR Mix，5× 1.5 μL 1.5 μL

DEPC-ddH2O 补到 20 μL 补到 20 μL

3. 轻柔混合均匀后放入 PCR 仪中进行 RT-PCR。

4. 设定 RT-PCR 反应条件时，一般将 RT 的条件设定成 50℃ 30 min，后接 94℃预变性 2 min，94℃变性 30 sec，退火 50-60℃ 30 sec，延伸 72℃ 1 kb/min，最后 3 步重复 30-40 个循环。终延伸 72℃ 5-10 min。 注意事项 1. 实验过程中请注意避免 RNase 污染。

2. 除酶以外的各种试剂，使用之前请完全溶解并充分混匀，以防因盐离子浓度不均影响实验结果。

3. RNA 模板的完整性对 cDNA 合成效率起着决定性作用，因此请选择可靠的 RNA提取/纯化方法。

4. 如果扩增片段较长或者 RNA 结构复杂，可以将 RNA 单独置于 65-70℃加热5-10 min 后再加入体系